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摘要：探讨背景支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)常见于早产儿,特别是极低出生体重儿(very low birth weight infant, VLBWI)和超低出生体重儿(extremely low birth weight infant, ELBWI),由于长时间吸入高浓度氧、长时间机械通气造成的压力伤或容量伤、感染而导致的一种慢性肺部疾病(Chronic lung disease, CLD)。随着通气对策的转变、产前糖皮质激素及生后肺表面活性物质的运用,早产儿、尤其是极低出生体重儿和超低出生体重儿的成活率显著提升,传统BPD的发病率有所下降,但新型BPD发病率呈逐年上升的走势。由于该病辅助用氧时间长,病死率高,存活者常遗留高反应性气道疾病、反复下呼吸道感染、喂养困难、生长发育迟缓等情况,对家庭和社会带来沉重的经济和精神负担,也严重影响患儿日后的生活质量。BPD的发病机制尚不完全清楚,目前仍无有效的监控及防治措施,由此,有关BPD发病机制和特异性治疗措施的探讨已成为当今新生儿领域探讨热点之一,也是保护我国有限医疗资源、提升优生优育战略国策的需要。根据病理学特点,BPD分为两种类型,即传统BPD和新型BPD。传统BPD由1967年Northway等首次报道并命名,病理体现为肺实质慢性炎症和纤维化,鳞状上皮化生、气道平滑肌过度增生；病变累及心血管系统时,血管内膜增殖、右室和肌层过度增生。但随着新生儿护理技术和治疗手段的不断改善,目前更为常见的是一种轻型BPD又称新型BPD。新型BPD病理转变以肺泡和肺面管发育不良为主要特点,体现为肺泡数目减少、体积增大、肺泡结构简单化,肺微血管形态异常,并可见持续炎症反应,而肺泡和气道损伤以及纤维化较轻。新型BPD的病因极其复杂,尽管氧中毒、气压伤或容量伤以及感染或炎症等各种不利因素对发育不成熟的肺导致的损伤仍然是BPD的发病基础,然而近年临床和实验探讨显示,虽然机械通气导致的肺损伤显著下降,但合并宫内感染或炎症的ELBWI的BPD发生率仍居高不下,提示：感染或炎症在“新型"BPD的病因中起重要作用。但其确切的发生机制目前仍不明确。过去人们对BPD的探讨热点多集中在肺间质纤维化和肺泡发育受阻方面,对于BPD防治一直没有突破性进展。近来,血管的异常变化在肺发育阻滞中的作用日益受到关注,调控肺血管发育的基因和蛋白也成为国内外探讨的新的热点。探讨发现：肺微血管发育异常可以导致BPD的发生。调控肺微血管发育的基因表达失衡会干扰肺微血管的正常发育以及减慢肺泡化进程,在BPD的发病机制中起了非常关键的作用。类表皮生长因子样域7(epidermal growth factor-pke domain7, EGFL7)是近年来发现的一种新型的血管内皮细胞特异分泌的蛋白,其属于表皮生长因子样域生长因子家族的一个成员,包含两个表皮生长因子样结构域(epidermal growth factor-pke domain)并在进化中高度保守,提示其可能参与蛋白间的相互作用和跨物种的重要生命活动。已有的探讨显示,EGFL7基因的表达有其特殊性,其主要高表达于肺、心和肾等血管丰富的器官和胎盘组织,由血管内皮细胞特异分泌到细胞外基质,可能以自分泌的方式推动血管生成。更重要的是,其在胚胎发育和新生儿肺成长历程中高水平表达,这种独特的表达方式强烈提示：EGFL7很可能是调控肺血管发育的重要因子。另有探讨表明：EGFL7在血管发育历程中发挥至关重要的作用。EGFL7是否通过调控肺微血管发育影响BPD的发生进展有待进一步探讨。氧中毒是导致BPD发生的重要因素之一。高氧暴露模型常用于BPD发病机理的探讨。新生儿高氧肺损伤是一个极其复杂的病理生理历程,其损伤机制涉及氧化／抗氧化失衡、炎性水肿、血管生成、细胞外基质重建、组织异常修复、细胞凋亡和信号传导系统异常等诸多因素,且这些因素交织成网,相互影响,共同形成高氧肺损伤的病理生理历程。最新探讨资料显示：在高氧(95%02)诱导的BPD动物模型中,EGFL7在肺组织中的表达显著下降；体外实验中,上调EGFL7可以抑制高氧诱导的脐内皮细胞凋亡,可能与抑制线粒体凋亡途径有关。但高氧肺损伤历程中血管内皮细胞凋亡机制尚未完全明确,EGFL7抑制高氧诱导的血管内皮细胞凋亡机制有待进一步探讨。体内试验中EGFL7是否能够抑制高氧诱导的肺微血管内皮细胞凋亡进而影响肺血管的正常发育历程值得进一步探讨。此外,最近一项探讨有力地证实了EGFL7的新的作用。探讨结果显示：在缺氧重新恢复供氧后,EGFL7可以抑制NF-κB核转位和人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)中细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白的表达,减轻炎症反应。提示：EGFL7可能作为一新型的抗炎因子,在炎症反应的始动环节中发挥了不容忽略的作用。NF-κB (nuclear factor-kappa B)是一种多功能的核转录调节因子,通过调控下游靶基因转录参与免疫炎症反应、细胞周期调控、细胞凋亡及细胞粘附等历程。探讨表明：NF-κB可以介导微管内皮细胞损伤,其发生机理主要与炎症性浸润引发的损伤和NF-KB活化后促血管内皮细胞的凋亡有关。炎症反应是BPD发生进展的一个重要因素,其可以损伤肺微血管内皮细胞,导致内皮细胞发生凋亡或坏死,进而阻滞肺微血管的发育。EGFL7是否可以通过影响NF-κB信号通路,抑制肺局部炎症反应的进展,减少肺微血管内皮细胞产生凋亡以而逆转肺微血管发育不良的病理历程,国内外尚未见报道。目前认为新型BPD的发病机制与肺微血管发育不良密切相关,调控肺微血管发育的基因和蛋白表达异常直接影响肺微血管的正常发育。我们已进行的探讨已经发现：60%02导致新生大鼠肺组织结构发生类似新型BPD的病理转变,同时高氧导致大鼠肺组织中EGFL7的表达显著下降。综上所述,我们有理由相信：EGFL7基因参与了新型BPD的发生进展历程,然而其在新型BPD发病学中的作用及其机制尚不清楚。EGFL7是否通过影响NF-κB信号通路,抑制肺局部炎症反应的进展,减少肺微血管内皮细胞产生凋亡以而逆转肺微血管发育不良,影响新型BPD的发生进展值得进一步探讨。本项目拟在构建人EGFL7(hEGFL7)真核表达载体并稳定转染内皮细胞系EA.hy926和建立内皮细胞高氧损伤模型的基础上,探讨EGFL7是否能通过影响NF-κB信号通路的激活,抑制炎症反应,进而减少高氧诱导的内皮细胞凋亡,为将来有效防治或延缓BPD的发生进展提供新的干预靶点。探讨策略1、细胞培养：EA.hy926及HUMVEC细胞分别用DMEM培养基和RPMI-1640培养基+10%胎牛血清培养,加入50μg/ml青霉素和链霉素,在温度37℃和5%CO2饱和湿度的培养箱中进行传代培养,2-3天更换一次培养基。2、构建hEGFL7真核表达载体并建立稳定转染的EA.hy926细胞系：运用RT-PCR以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的cDNA文库中扩增EGFL7的开放阅读框(ORF),经过双酶切(HindⅢ和BamHI)将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,得到重组表达质粒pEGFP-N1-EGFL7。经过测序鉴定后,利用电转仪转染EA.hy926细胞,通过G418筛选建立稳定转染的EA.hy926细胞系。实时荧光定量PCR (Real-time PCR)和免疫印迹法(western bloting)检测EGFL7在稳定转染的EA.hy926细胞系中的表达。3、建立内皮细胞的高氧损伤模型：将EA.hy926、EA.hy926-pEGFP-N1和EA.hy926-pEGFP-EGFL7细胞各自随机分为常氧组和高氧组。常氧组给予5%C02+95%空气的混合气,在温度37℃和5%CO2饱和湿度的培养箱中进行培养、高氧组给予5%CO2+60%02+35%N2的混合气,在温度37℃和5%CO2饱和湿度的培养箱中进行培养,纫胞培券之前用5%CO2+60%O2+35%N2的混合气以10L/mmin-’通10分钟。设定24h、48h、72h三个时间点,观察高氧组和常氧组中EGFL7表达、细胞凋亡、NF-KB核转位及TNF-α、ICAM-1表达的情况。3.1运用Real-time PCR和Western Blotting分别检测各组细胞中EGFL7mRNA和蛋白的动态表达水平。3.2运用流式细胞术Avnexin V FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,运用Western Blotting检测各组细胞中procaspase-3及cleed caspase-3蛋白的动态表达。3.3运用Western Blotting检测各组细胞胞浆和胞核中NF-κB、Iκb-α蛋白的动态表达,运用免疫荧光检测NF--κb核转位情况。3.4运用Western Blotting检测各组细胞中ICAM-1、TNF-α蛋白的动态表达。4、统计学浅析：所有数据经统计学浅析软件SPSS13.0进行处理,所测数据均以均数±标准差(X±S)表示；Real-time PCR的结果采取2-△△CT值浅析,设定细胞系EA.hy926中EGFL7mRNA的2-△△CT值为1,EA.hy926和N1-EA.hy926组间比较采取单样本t检验,N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926组间比较采取两独立样本t检验；细胞系EA.hy926高氧损伤模型中EGFL7mRNA在各时间点组间比较采取单样本t检验；Western Blotting数据是采取ImageJ软件浅析得到的Density ratio浅析,细胞系EA.hy926、N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926组间EGFL7蛋白的表达量组间先进行方差齐性检验,若方差齐,则采取完全随机设计资料的方差浅析(one-way ANOVA),若方差不齐,则采取Welch法；两两比较若方差齐,则采取LSD法,若方差不齐,则采取Dunnett's T3法；高氧损伤模型中各时间点EGFL7、NF-κB通路相关蛋白表达量组间比较均采取两独立样本t检验；高氧损伤模型中细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达量,过表达EGFL7高氧损伤模型中EGFL7和NF--κB通路相关蛋白表达量、细胞凋亡率和凋亡相关蛋白表达量的组间比较均采取析因设计资料的方差浅析；以上均取P0.05表示差别有统计学作用。结果1.成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-EGFL7,建立了稳定转染的EA.hy926细胞系,并通过Real-time PCR和Western Blotting鉴定了EGFL7在该细胞系中过表达。2.成功建立内皮细胞系EA.hy926的高氧损伤模型2.160%02致EA.hy926细胞中EGFL7mRNA蛋白的动态转变2.1.1EA.hy926细胞中EGFL7mRNA的表达：对照组中EGFL7mRNA表达水平较高,各时间点差别无统计学作用(F=0.159,P=0.925)。与对照组相比,实验组在各时间点EGFL7mRNA表达水平下降43.65%-79.92%,差别均有统计学作用(t值分别为-12.167、-29.611、-23.871,P值分别为0.007、0.001、0.002)。2.1.2EGFL7蛋白的表达：对照组可见较高的EGFL7蛋白表达水平,各时间点差别无统计学作用(F=0.459,P=0.584)。与对照组相比,实验组在各时间点EGFL7蛋白表达水平下降27.23%-75.89%,差别均有统计学作用(t值分别为3.075、7.570、9.250,P值分别为0.037、0.002、0.01)。实验组EGFL7蛋白表达水平与其mRNA表达水平变化基本一致。2.260%02致EA.hy926中细胞凋亡的动态转变2.2.1流式细胞术Annexin V FITC/PI双染法检测细胞凋亡结果显示：不同处理和处理后不同时间有着交互效应(F=10.302,P=0.012)。高氧加重了EA.hy926细胞凋亡。不同处理组间,与对照组相比,在高氧暴露48h和72h后,实验组细胞凋亡率分别由3.69%、7.00%增加到30.66%、33.73%,差别均有统计学作用(t值分别为-14.017、-35.175,P值均0.001)；不同时间点间(48h和72h),对照组和实验组中细胞凋亡率随着时间的延长而升高,差别均有统计学作用(t值分别为-5.452、-3.650,P值分别为0.005、0.023)。2.2.2caspase-3蛋白的表达：不同caspase-3蛋白表达水平的变化反映细胞凋亡情况与流式细胞术检测细胞凋亡情况一致。2.2.2.1procaspase-3蛋白的表达：不同处理和处理后不同时间有着交互效应(F=0.899,P=0.371)。不同处理组间,与对照组相比,在高氧暴露48h和72h后,实验组procaspase-3蛋白表达水平下降46.68%-75.30%,差别均有统计学作用(t值分别为12.422、47.539,P值均0.001)；不同时间点间(48h和72h),对照组和实验组中procaspase-3蛋白表达水平均随着时间的延长而下降；差别均有统计学作用,(t值分别为4.034、17.691,P值分别为0.016、0.001)。2.2.2.2cleed caspase-3蛋白的表达：不同处理和处理后不同时间有着交互效应(F=41.825,P0.001)。不同处理组间,与对照组相比,在高氧暴露48h和72h后,实验组cleed caspase-3蛋白表达水平升高1.15-3.60倍,差别均有统计学作用(t值分别为-41.633、-39.190,P值均0.001)；不同时间点间(48h和72h),对照组和实验组中cleed caspase-3蛋白表达水平均随着时间的延长而升高,差别均有统计学作用(t值分别为-61.615、-6.846,P值分别为0.001,0.002)。2.360%O2致EA.hy926细胞中NF-κB核转位的动态变化2.3.1细胞胞核和胞浆中NF-κB通路相关蛋白表达：胞浆中iκb-α、NF-κB P65及胞核中NF-κB P65蛋白表达的变化均提示实验组NF-κB活性激活,发生核转位。2.3.1.1胞浆中iκb-α蛋白的表达：对照组胞浆中可见较高的iκb-α蛋白表达水平,各时间点差别无统计学作用(各组方差不齐,故采取Kruskal-walps H检验,P=0.513)。与对照组相比,在各时间点实验组iκb-α蛋白表达水平降低35.36%-44.51%,差别均有统计学作用(t值分别为4.985、9.400、19.044,P值分别为0.036、0.001、0.001)。2.3.1.2胞浆中NF-κB P65蛋白的表达：对照组胞浆中可见较高的NF-κB P65蛋白表达水平,各时间点差别无统计学作用(F=2.256,P=0.186)。与对照组相比,在各时间点实验组NF-κB P65蛋白表达水平下降12.98%-64.40%,差别均有统计学作用(t值分别为3.378、6.053、10.635,P值分别为0.029、0.004、0.001)。2.3.1.3胞核中NF-κB P65蛋白的表达：对照组胞核中可见较低的NF-κB P65蛋白表达水平,各时间点差别无统计学作用(F=4.341,P=0.068)。与对照组相比,在各时间点实验组NF-kB P65蛋白表达水平升高1.40-2.90倍,差别均有统计学作用(t值分别为-20.543、-29.678、-15.031,P值分别为0.002、0.001、0.001)。2.3.2免疫荧光结果示：在高氧暴露24h时,实验组中NF-kb活性较对照组增强,高氧诱导NF-kb发生核转位。2.460%O2致EA.hy926细胞中ICAM-1、TNF-α蛋白水平的动态变化2.4.1TNF-α蛋白的表达：对照组可见较低的TNF-α蛋白表达水平,各时间点差别无统计学作用(F=4.341,P=0.068)。与对照组相比,在各时间点实验组TNF-α蛋白表达水平升高0.41-1.08倍,差别均有统计学作用(t值分别为-5.251、-10.528、-8.762,P值分别为0.006、0.001、0.001)。2.4.2ICAM-1蛋白的表达：对照组可见较低的ICAM-1蛋白表达水平,各时间点差别无统计学作用(F=0.057,P=0.945)。与对照组相比,在各时间点实验组ICAM-1蛋白表达水平升高4.09-8.69倍,差别均有统计学作用(t值分别为-12.809、-42.097、-34.023,P值分别为0.006、0.001、0.001)。3. EGFL7过表达对高氧诱导内皮细胞凋亡的影响3.1流式细胞术Annexin V FITC/PI双染法检测细胞凋亡结果显示：不同处理、不同细胞、处理后不同时间所有组合的交互效应均显著(P值均0.05)。N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926细胞中,高氧均加重了细胞凋亡。与对照组相比,暴露于高氧48h和72h后,N1-EA.hy926中细胞凋亡率分别由5.45%、14.63%增加到45.82%、57.94%,hEgfl7-EA.hy926中细胞凋亡率分别由2.05%、11.71%增加到17.93%、30.89%,差别具有统计学作用(F=80.441,P0.001)；不同时间点间,对照组和实验组中细胞凋亡率随着时间的延长而升高,差别具有统计学作用(F=42.551,P0.001)。3.2caspase-3蛋白的表达：不同caspase-3蛋白表达水平的变化反映细胞凋亡情况与流式细胞术检测细胞凋亡情况一致。3.2.1procaspase-3蛋白的表达：不同处理、不同细胞的交互效应显著(F=9.633,P0.001)。N1：EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926细胞中,高氧均使procaspase-3蛋白表达水平下降。与对照组相比,暴露于高氧48h和72h后,N1-EA.hy926中procaspase-3蛋白表达水平下降65.11%-92.92%,hEgfl7-EA.hy926中procaspase-3蛋白表达水平下降34.33%-38.61%,差别具有统计学作用(F=-63.452,P0.001)。hEgfl7-EA.hy926中procaspase-3蛋白表达下降比N1-EA.hy926中减少,差别具有统计学作用(F=5.841,P=0.028)3.2.2cleed caspase-3蛋白的表达：不同处理、不同细胞的交互效应显著(F=179.123, P0.001)。N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926细胞中,高氧均使cleed caspase-3蛋白表达水平升高。与对照组相比,暴露于高氧48h和72h后,N1-EA.hy926中cleed caspase-3蛋白表达水平升高2.72-2.98倍,hEgfl7-EA.hy926中cleed caspase-3蛋白表达水平升高0.21-0.32倍,差别具有统计学作用(F=284.093,P0.001)。hEgfl7-EA.hy926中cleed caspase-3蛋白表达升高比N1-EA.hy926中减少,差别具有统计学作用(F=126.659,P0.001)。4、EGFL7过表达对高氧损伤细胞模型中NF-KB核转位的影响4.1胞浆中iKb-α蛋白的表达：不同处理、不同细胞的交互效应显著(F=13.669,P=0.002)。N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926细胞中,高氧均使胞浆中iκb-α蛋白表达水平下降。与对照组相比,暴露于高氧48h和72h后,N1-EA.hy926胞浆中iκb-α蛋白表达水平下降55.54%-55.57%,hEgfl7-EAhy926胞浆中iKb-α蛋白表达水平下降4.98%-23.05%,差别均具有统计学作用(F=42.815,P0.001)。hEgfl7-EA.hy926胞浆中iKb-a蛋白表达下降比N1-EA.hy926中减少,差别均具有统计学作用(F=17.114,P=0.001)4.2胞浆中NF-κB P65蛋白的表达：不同处理、不同细胞的交互效应显著(F=5.736,P=0.029)。N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926细胞中,高氧均使胞浆中NF-κB P65蛋白表达水平下降。与对照组相比,暴露于高氧48h和72h后,N1-EA.hy926胞浆中NF-κB P65蛋白表达水平下降39.97%-49.51%hEgfl7-EA.hy926胞浆中NF-κB P65蛋白表达水平下降17.50%-20.81%,差别具有统计学作用(F=37.245,P0.001)。hEgfl7-EA.hy926胞浆中NF-KB P65蛋白表达升高比N1-EA.hy926中减少,差别具有统计学作用(F=6.348,P=0.023)。4.3胞核中NF-κB P65蛋白的表达：不同处理、不同细胞的交互效应显著(F=92.589,P0.001)。N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926细胞中,高氧均使胞核NF-κB P65蛋白表达水平升高。与对照组相比,暴露于高氧48h和72h后,N1-EA.hy926胞核中NF-κB P65蛋白表达水平升高0.44-0.79倍,hEgfl7-EA.hy926胞核中NF-κB P65蛋白表达水平升高0.09-0.25倍,差别具有统计学作用(F=231.699,P0.001)。hEgfl7-EA.hy926胞核中NF-κB P65蛋白表达升高比N1-EA.hy926中减少,差别具有统计学作用(F=119.950,P0.001)5、EGFL7过表达对高氧损伤细胞模型中ICAM-1、TNF-α蛋白表达的影响5.1TNF-α蛋白的表达：不同处理、不同细胞的交互效应显著(F=102.700,P0.001)。N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926细胞中,高氧均使TNF-a蛋白表达水平升高。与对照组相比,暴露于高氧48h和72h后,N1-EA.hy926中TNF-a蛋白表达水平升高1.60-1.48倍,hEgf17-EA.hy926中TNF-a蛋白表达水平升高0.18-0.5倍,差别具有统计学作用(F=282.220,P0.001)。hEgfl7-EA.hy926中TNF-a蛋白表达升高比N1-EA.hy926中减少,差别均具有统计学作用(F=66.812,P0.001)。5.2ICAM-1蛋白的表达：不同处理、不同细胞的交互效应显著(F=80.542,P0.001)。N1-EA.hy926和hEGFL7-EA.hy926细胞中,高氧均使ICAM-1蛋白表达水平升高。与对照组相比,暴露于高氧48h和72h后,N1-EA.hy926中ICAM-1蛋白表达水平升高0.96-0.99倍,hEgfl7-EA.hy926中ICAM-1蛋白表达水平升高0.03-0.34倍,差别具有统计学作用(F=152.768,P0.001)。hEgfl7-EA.hy926中ICAM-1蛋白表达升高比Nl-EA.hy926中减少,差别具有统计学作用(F=154.854,P0.001)。结论1、成功构建了真核表达载体pEGFP-Nl-EGFL7,建立了稳定转染的EA.hy926细胞系,并验证了EGFL7基因在该细胞系中过表达,为探讨EGFL7在高氧诱导内皮细胞凋亡历程中的作用与机制奠定良好的实验基础。2、EA.hy926细胞高氧损伤模型中,EGFL7mRNA和蛋白的表达减少,对照组中EGFL7有着一定量的基础表达,60%02导致EGFL7的表达降低,验证60%中浓度氧建立内皮细胞高氧损伤模型的可行性,推测EGFL7可能参与了新型BPD的发生进展历程；实验组中细胞凋亡率较对照组升高,提示高氧可以诱导的皮细胞凋亡,推测新型BPD的发生可能与高氧导致的肺微血管内皮细胞凋亡有关；实验组中NF-κB发生核转位,同时炎性介质ICAM-K TNF-α的表达水平升高,均与细胞凋亡率升高走势一致,推测高氧诱导内皮细胞凋亡的机制可能与N F-κB介导的炎症反应有关。3、EGFL7过表达可以减少高氧诱导的内皮细胞凋亡,同时抑制NF-KB活性,降低ICAM-K TNF-α的表达,进一步验证高氧诱导内皮细胞凋亡的机制可能与NF-κB介导的炎症反应有关,推测EGFL7可能通过影响NF-κB信号通路的激活,抑制炎症反应,进而减少高氧诱导的内皮细胞凋亡,为将来有效防治或延缓BPD的发生进展提供新的干预靶点。关键词：早产儿论文支气管肺发育不良论文高氧论文EGFL7论文NF-κb核转位论文细胞凋亡Epidermal论文growth论文factor-pke论文domain7protects论文endothepal论文cells论文from论文hyperoxia-induced论文cell论文death论文by论文preventing论文nuclear论文factor-κB论文nuclear论文locapzation论文
摘要3-14
ABSTRACT14-29
前言29-34
第一部分 人EGFL7真核表达载体及稳定转染EA.hv926细胞系的建立34-45
1 材料与策略34-39
2 结果39-40
3 讨论40-41
4 附图及数据表41-45
第二部分 EGFL7、NF-κb在内皮细胞系EA.hy926高氧损伤模型中的表达及其与细胞凋亡联系的探讨45-76
1 材料与策略46-56
2 结果56-59
3 讨论59-64
4 附图及数据表64-76
第三部分 过表达EGFL7抑制NF-κB核转位减少高氧诱导内皮细胞机制探讨76-100
1 材料与策略77
2 结果77-80
3 讨论80-83
4 附图及统计表83-100
结论100-101