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摘要：目的：本实验通过建立真菌透甲模型，探讨林生地霉、白地霉在体外能否侵犯健康甲板，并通过测定透甲时间来比较两种地霉和红色毛癣菌的侵袭作用，同时采取扫描电镜微观观察受侵甲组织的情况。检测两种地霉和红色毛癣菌的细胞外分泌酶活性，比较三者的异同性，结合第一部分结果进行浅析，讨论真菌胞外酶与对宿主的侵袭作用的联系。林生地霉（Geotrichum silvicola）为新近发现的一种罕见地霉[1]，我科相继以一例脓癣患儿皮损中和一例中毒性表皮坏死松解症患者的血液中分离得到林生地霉[2,3]，首次证明林生地霉能够侵犯人类。白地霉(Geotrichum candidum)是地霉属的经典代表菌种，为条件性致病菌，以支气管感染最多见。至今未有地霉属真菌侵犯指甲的相关病例报道。红色毛癣菌（Trichophytonrubrum）为亲人性皮肤癣菌，主要侵犯皮肤、指（趾）甲，是我国甲真菌病优势致病菌[4.5]，此试验中红色毛癣菌作为阳性对照菌。策略：林生地霉为河北医科大学第四医院真菌室保存，由中国科学院微生物探讨所鉴定。白地霉标准菌株购自中国科学院微生物探讨所菌种保藏中心。红色毛癣菌购自北京医科大学附属第一医院真菌实验室。三株真菌均经过复苏培养及形态学和生化鉴定。1.建立真菌透甲模型，分为林生地霉组、白地霉组和红色毛癣菌组，其中红色毛癣菌组设定为阳性对照组，各组均包括1个阴性对照模型（即不加任何菌种）和1个阳性对照模型（将菌悬液直接加入液体培养基中），观察并记录各组透甲时间，采取统计学策略比较是否有着差别性。2.采取扫描电镜观察受侵甲板的微观变化及菌丝和孢子的形态。3.通过半定量API ZYM细胞外酶活性系统(法国梅里埃生物公司)测定出林生地霉、白地霉及红色毛癣菌的19种胞外酶，包括四种酯酶、五种蛋白酶、二种水解酶和八种糖发酵酶。结果：1.本实验中，三种真菌菌株均能透过甲板模型，其中林生地霉的透甲时间为(15.07±3.28)d,白地霉的透甲时间为(14.50±1.67)d，红色毛癣菌的透甲时间为(6.76±1.72)d。林生地霉和白地霉的透甲时间均显著长于红色毛癣菌（P＜0.05），林生地霉和白地霉的透甲时间无统计学差别（P＞0.05）。2.扫描电镜观察：三株菌株均有菌丝以角化细胞缝隙及细胞穿过；3. API-ZYM试剂盒测定结果显示：(1)红色毛癣菌菌株碱性磷酸酶、胰凝乳蛋白酶及多数糖发酵酶活性显著高于林生地霉和白地霉；(2)白地霉和林生地霉的胞外酶谱大致相同，二株菌株具有很高的同源性；(3)三株真菌均含有的胞外酶有：酯酶、类脂酯酶C8、白氨酸芳氨酶、缬氨酸芳氨酶、酸性磷酸酶、萘酚-AS-BI-磷酸水解酶。结论：1.林生地霉和白地霉均能穿透甲板，但透甲时间显著长于红色毛癣菌；2.扫描电镜观察：林生地霉、白地霉及红色毛癣菌侵袭的甲板均可观察到有菌丝穿过甲板，菌丝多以角化形成细胞边缘间隙中穿过，部分菌丝直接以角化细胞穿出；3.白地霉和林生地霉的胞外酶谱大致相同；4.红色毛癣菌大部分胞外酶活性显著高于林生地霉和白地霉,碱性磷酸酶、胰凝乳蛋白酶及糖发酵酶可能是分解破坏甲板组织的主要作用酶。关键词：白地霉论文林生地霉论文透甲时间论文扫描电镜论文胞外酶论文
摘要4-6
ABSTRACT6-8
引言8
第一部分 两种地霉对体外健康甲板侵袭力的探讨8-18
前言8-9
材料与策略9-12
结果12-13
附图13-16
附表16-17
小结17-18
第二部分 两种地霉的胞外酶谱测定及比较18-25
前言18
材料与策略18-19
结果19-20
附图20-21
附表21-22
讨论22-25
小结25