摘要：ATP(adenosine triphosphate,三磷酸腺苷又称腺苷三磷酸)生物发光测定技术具有方便、快捷等特点,加之对ATP测定的特异性和高灵敏度,因而在临床医学的细菌检验方面得到了广泛的运用,并为世界卫生组织(WHO)所确认,目前这一技术在发达国家已越来越多地用于细菌的检验。运用ATP生物发光技术测定细菌策略的论述基础在于ATP普遍有着于包括细菌在内的一切活细胞内,并且在一定条件下其含量相对稳定,当细菌死亡时体内的ATP将被自身的酶所降解,以而使得ATP的有着成为检测样品中有无细菌的依据；在定量测定ATP的策略中,以荧光素—荧光素酶测定法最为灵敏,当所有反应物过量时,其发光强度与ATP的数量成正比,由此根据细菌ATP提取液的发光强度即可推算出样品含菌量的多少。但高岳等(2007)在运用ATP生物发光技术检测脱水香葱和胡椒粉的辐照灭菌效果时,却出现了样品细菌ATP提取液的发光强度均高于对照,与实际含菌量动态变化不一致的现象,其影响机理尚不清楚,目前也未见报道。为了使ATP生物发光检测技术能在产品的辐照灭菌效果方面得以运用,本论文围绕辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响进行了探讨,结果表明：1、运用ATP生物发光技术分别检验辐照处理后脱水蔬菜中的含菌量,均出现了发光强度与实际含菌量两者动态变化不一致的现象,说明了辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响具有普遍性。2、通过光谱浅析可以看出：1)辐照前、后样品细菌ATP提取液生物发光光谱的波长范围相同,光谱峰值对应的波长也无显著差别,依据以上两个光谱特点浅析,辐照并未转变样品的发光性质,由此可以认定辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响是通过ATP生物发光系统体现出来的。2)辐照对样品细菌ATP提取液生物发光光谱的峰值产生了影响。光谱曲线峰值的升高,说明辐照处理增加了样品细菌ATP提取液中ATP的浓度。3、对高温灭菌后的脱水蔬菜进行辐照处理,并运用ATP生物发光技术检测样品的发光强度,结果表明辐照后的脱水蔬菜材料本身并没有对ATP的生物发光强度产生影响；而运用ATP生物发光技术检测辐照处理后大肠杆菌菌液的含菌量时,却出现了发光强度与实际含菌量不一致的现象,说明辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响来自于辐照处理后的细菌。4、辐照处理后大肠杆菌菌液样品中游离ATP的发光强度均极显著的高于对照。发光强度的升高说明辐照处理已显著的增加了样品中游离ATP的数量。辐照处理并未增加LB无菌培养液ATP的生物发光强度,样品中增加的游离ATP只能来自于辐照后的大肠杆菌。5、对大肠杆菌总ATP酶活性的测定结果显示辐照剂量越大、样品总ATP酶的活性就越低。ATP酶是分解ATP的专一性酶,ATP酶活性的降低,使死亡细菌体内ATP的降解受阻,增加了样品中游离ATP的数量。6、在去除样品中游离ATP后,样品细菌ATP提取液的生物发光强度与样品的含菌量两者的动态变化已趋于一致,由此可以说明辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响是由于样品中游离ATP浓度的增加所造成的。综上所述,辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响是由于电离辐射在杀灭样品中细菌的同时,也降低了细菌体内ATP酶的活性,使死亡细菌体内的ATP不能随细菌的死亡而迅速降解,并以细菌体内扩散出来,以而增加了样品中游离ATP的数量,导致了细菌ATP提取液的发光强度与实际含菌量动态变化走势的不一致。由此在运用ATP生物发光技术检测产品的辐照灭菌效果时必须考虑样品中游离ATP对检测所带来的影响。本探讨对拓宽ATP生物发光检测的运用领域、改善ATP生物发光检测的策略具有一定的论述和实际作用。关键词：辐照论文脱水蔬菜论文含菌量论文ATP生物发光检测论文光谱论文ATP酶论文
摘要5-7
ABSTRACT7-10
1 前言10-20
1.1 本探讨的立题背景10-13
1.1.1 辐照技术在食品安全领域的运用背景10
1.1.2 辐照行业的规范化管理需要一种快速菌检的策略10-11
1.1.3 ATP生物发光技术与细菌的快速检验11-12
1.1.4 辐照对脱水蔬菜细菌ATP提取液生物发光的影响12-13
1.2 国内、外与本探讨有关的文献报道13-19
1.2.1 化学发光、生物发光与生物超弱发光13-15
1.2.2 ATP的理化性质15-16
1.2.3 虫荧光素酶发光系统16-17
1.2.4 ATP生物发光技术在细菌检测方面的探讨与运用17-18
1.2.5 与本项目探讨有关的辐射生物学效应18-19
1.3 本探讨的目的与作用19-20
2 材料与策略20-23
2.1 供试材料与仪器20
2.1.1 供试材料20
2.1.2 实验所用试剂20
2.1.3 样品的辐照处理20
2.1.4 生物发光测量仪器20
2.2 主要探讨项目与测定策略20-23
3 结果与浅析23-37
3.1 生物微弱发光仪的稳定性测试23
3.2 ATP浓度与发光强度的相关性浅析23-25
3.3 辐照对脱水蔬菜的含菌量与ATP生物发光强度的相关性浅析25-28
3.3.1 辐照对脱水蔬菜含菌量的影响25-27
3.3.2 辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光的影响27-28
3.4 辐照对脱水蔬菜细菌ATP提取液本底发光的影响28-29
3.5 辐照对脱水高丽菜细菌ATP提取液生物发光光谱的影响浅析29-33
3.5.1 ATP标样生物发光光谱的测试与浅析29-31
3.5.2 脱水高丽菜细菌ATP提取液的生物发光光谱浅析31-33
3.5.2.1 辐照对脱水高丽菜细菌ATP提取液生物发光光谱波长范围影响31
3.5.2.2 辐照对脱水高丽菜细菌ATP提取液生物发光光谱峰时的影响31-32
3.5.2.3 辐照对脱水高丽菜细菌ATP提取液生物发光光谱峰值的影响32-33
3.6 辐照对ATP生物发光法检测脱水蔬菜含菌量的影响浅析33-37
3.6.1 无菌脱水蔬菜辐照后对ATP生物发光的影响33
3.6.2 细菌辐照后对其ATP生物发光的影响33-34
3.6.3 辐照处理对大肠杆菌菌液和LB无菌培养液中游离ATP的影响34-35
3.6.4 辐照对细菌总ATP酶活性的影响35
3.6.5 游离ATP对脱水香葱细菌ATP生物发光的影响35-37
4 小结与讨论37-39
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