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多糖粒毛盘菌YM218胞外多糖深层发酵与抗肿瘤活性流程

收藏本文 2024-01-08 点赞:7939 浏览:25186 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:真菌胞外多糖是真菌在细胞内合成后分泌到胞外的一类多糖,科学实验表明,真菌胞外多糖具有很强烈的抗肿瘤活性,对癌细胞有很强的抑制力。由于胞外多糖具有产生量大、易于与菌体分离等特点,因而可通过深层发酵实现工业化生产。本论文对Lachnum sp.YM218胞外多糖的发酵条件及提取工艺进行了探讨,并初步探讨了该多糖的抗肿瘤生物活性。以获取较高胞外多糖产量为目的,通过正交试验,确定液体发酵最佳培养基组成为:葡萄糖30g/L、酵母膏12.5g/L、Ca(OH)_20.05g/L。最佳液体培养条件为:起始pH值6.5、培养温度28℃、摇床转速210r/min。在该培养条件下,YM218胞外多糖发酵周期由12d缩短为10d;胞外多糖最高产量由优化前的4.247g/L提升到9.917g/L,相对于优化前提升了133.51%。在摇瓶发酵的基础上,利用5L发酵罐进行深层发酵试验,确定5L发酵罐的最优发酵条件为:装液系数为0.5,接种量10%,转速230r/min,通气量3L/min。在此培养条件下,胞外多糖的最高产量由优化前11.756g/L提升到13.358g/L,比优化前提升了13.63%。以获取较高的胞外多糖活性为目的,确定YM218胞外多糖的最佳提工艺为:将离心去除菌丝体的发酵液调至中性(pH=7),离心去除沉淀,55℃下浓缩至原体积的1/4,冷却后加入无水乙醇溶液至终浓度75%,4℃静置24h,5000r/min离心15min,收集沉淀,沉淀经无水乙醇,,丙酮反复洗涤后,低温真空干燥,得胞外粗多糖。通过测定YM218胞外多糖抗肿瘤活性来探讨其生物活性,探讨结果表明:50%醇沉粗多糖的抗肿瘤活性最好,且抑制作用具有剂量依赖性,浓度为0.4mg/mL时,对Hep-2细胞增殖的抑制率达到84.46%,IC_(50)为0.13mg/mL。关键词:Lachnum论文胞外多糖论文液体发酵论文提取工艺论文生物活性论文

    摘要3-4

    Abstract4-8

    文献综述8-17

    2 材料和策略17-23

    2.1 材料17-18

    2.1.1 菌种17

    2.1.2 细胞株17

    2.1.3 培养基17

    2.1.4 仪器设备与试剂17-18

    2.1.5 主要试剂的配制18

    2.2 策略18-23

    2.2.0 摇瓶种子制备18

    2.2.1 粒毛盘菌 YM218 胞外多糖发酵培养18-19

    2.2.2 胞外多糖含量的测定19

    2.2.3 胞外多糖(EPS)的分离提取19-20

    2.2.4 生物量的测定20

    2.2.5 YM218 胞外多糖摇瓶发酵条件的优化20-21

    2.2.6 深层发酵21

    2.2.7 YM218 胞外多糖的制备21-22

    2.2.8 细胞培养[84]22

    2.2.9 胞外多糖抗肿瘤活性的测定22-23

    3 结果与浅析23-38

    3.1 YM218 胞外多糖摇瓶发酵培养基优化23-26

    3.1.1 不同碳源及其质量浓度对 YM218 胞外多糖产量的影响23-24

    3.1.2 不同氮源及其质量浓度对 YM218 胞外多糖产量的影响24-25

    3.1.3 无机盐对 YM218 胞外多糖产量的影响25-26

    3.2 YM218 胞外多糖摇瓶发酵条件优化26-29

    3.2.1 起始 pH 值对 YM218 胞外多糖产量的影响26-27

    3.2.2 温度对 YM218 胞外多糖产量的影响27

    3.2.3 转速对 YM218 胞外多糖产量的影响27-28

    3.2.4 培养时间对 YM218 胞外多糖产量的影响28-29

    3.3 正交试验结果29-30

    3.4 YM218 胞外多糖摇瓶发酵生长曲线的确定30

    3.5 5L 发酵罐发酵条件优化30-33

    3.5.1 搅拌转速对胞外多糖产量的影响30-31

    3.5.2 通气量对胞外多糖产量的影响31-32

    3.5.3 YM218 发酵罐发酵生长曲线的确定32-33

    3.6 胞外多糖提取工艺优化33-36

    3.6.1 不同 pH 条件下对胞外多糖得率的影响33-34

    3.6.2 不同提取温度对胞外多糖得率的影响34-35

    3.6.3 不同浓缩倍数对胞外多糖得率的影响35-36

    3.7 胞外多糖抗肿瘤活性探讨36-38

    3.7.1 乙醇分级沉淀36

    3.7.2 乙醇分级沉淀获得的多糖样品对 Hep-2 细胞增殖抑制率的测定36-37

    3.7.3 不同浓度的样品 3 对 Hep-2 细胞增殖抑制率的测定37-38

    4 讨论38-41

    4.1 培养基对 YM218 胞外多糖液体发酵的影响38

    4.2 YM218 胞外多糖液体发酵条件的探讨38-39

    4.3 通气量和搅拌速度对 YM218 胞外多糖深层发酵的影响39

    4.4 YM218 胞外多糖提取工艺的探讨39

    4.5 YM218 胞外多糖抗肿瘤活性的探讨39-41

    5 结论41-42

    5.1 粒毛盘菌 YM218 摇瓶发酵条件优化41

    5.2 粒毛盘菌 YM2185L 发酵罐发酵发酵条件优化41

    5.3 粒毛盘菌 YM218 胞外多糖提取工艺41

    5.4 粒毛盘菌 YM218 胞外多糖抗肿瘤活性41-42

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