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试议黄檗黄檗叶黄酮类化合物分离纯化与活性中国

收藏本文 2024-03-12 点赞:6348 浏览:18262 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:黄檗是我国传统名贵中药黄柏的重要植物来源,其入药部位主要是黄檗的树皮,而黄檗叶子等其他部位尚未得到有效利用。探讨发现,黄檗落叶对周围植物具有化感作用,并且亦会抑制自身种子的萌发,由此,黄檗落叶限制了其自我更新的能力。此外,由于黄檗巨大的药用价值,市场需求量很大,在供给联系的严重失衡以及利益的驱使下,加剧了人们对野生黄檗资源的掠取,黄檗资源由此遭受严重破坏。本论文以黄檗叶中提取、分离纯化黄酮类化合物,对其进行活性探讨,充分有效地利用黄檗资源有助于缓解黄檗自我更新的障碍,有利于生态系统中生物多样性的形成,保护处于濒危状态的黄檗资源。本论文探讨包括以下三个方面:黄檗叶黄酮类化合物提取策略的优化;黄酮类化合物的分离纯化及分离得到单体化合物的结构测定和活性测定。通过单因素实验和正交实验确定最佳提取条件为:料液比为1:20,乙醇浓度为60%,提取温度为70℃,提取时间为2.5小时,回流提取2次。通过光谱扫描和颜色反应等实验初步确定提取液中主要含有二氢黄酮醇类成分。将利用最佳提取工艺得到黄檗叶黄酮粗提液将其进行纯化分离,首先利用石油醚萃取除去色素和酯类等杂质,再用乙酸乙酯进一步萃取得到黄酮萃取液(PLF)。黄酮萃取液经过硅胶柱层析,以不同比例的甲醇和氯仿作为洗脱剂进行梯度洗脱,通过薄层层析法检测组分,通过抗氧化实验筛选具有活性的组分,液相色谱检测浅析活性组分中主要含有三种成分(PLF_1、PLF_2、PLF_3),将其通过制备液相纯化得到一种黄酮单体,再经高分辨液质联用仪确定其分子量及分子式,经核磁共振波谱仪浅析其分子结构,最终确定所得黄酮单体为黄柏苷(PLF3)。通过FRAP法、DPPH法、超氧阴离子自由基清除实验分别对黄酮粗提液、黄酮萃取液(PLF)及黄柏苷(PLF_3)进行活性探讨并加以比较,实验表明,三者都具有抗氧化活性,经过纯化的黄酮萃取液其抗氧化能力高于未经任何纯化的黄酮粗提液(PLF),黄柏苷(PLF_3)亦具有较强抗氧化活性,在浓度为4mg/mL时,DPPH自由基清除率达到92.87%,FRAP法测定其总抗氧化能力随着浓度的升高而增强。实验还表明黄酮萃取液能有抑制肿瘤细胞DNA拓补异构酶Ⅰ的活性,这说明黄檗叶黄酮类化合物具有潜在的抗肿瘤作用,并通过MTT法确定了黄檗叶黄酮对肿瘤细胞有一定的抑制作用。关键词:黄檗论文黄酮论文抗氧化论文

    中文摘要4-6

    Abstract6-11

    第一章 前言11-25

    1.1 黄檗介绍11-16

    1.1.1 黄檗的化学成分12-13

    1.1.2 黄檗的药理作用13-16

    1.2 黄酮介绍16-24

    1.2.1 黄酮的性质18-20

    1.2.2 黄酮的提取20-21

    1.2.3 黄酮类化合物的纯化21-22

    1.2.4 黄酮类化合物抗氧化活性与结构的联系22-23

    1.2.5 抗肿瘤活性与结构的联系23-24

    1.3 本课题探讨目的及作用24-25

    第二章 黄檗叶黄酮提取工艺探讨25-36

    引言25

    2.1 材料、试剂与仪器25-26

    2.1.1 原料25

    2.1.2 主要试剂25

    2.1.3 主要仪器25-26

    2.2 实验策略26-28

    2.2.1 黄檗叶的前处理26

    2.2.2 总黄酮含量的测定26

    2.2.3 黄酮提取的单因素实验26-27

    2.2.4 正交试验27

    2.2.5 紫外吸收光谱测定27

    2.2.6 黄酮提取物化学性质测定27-28

    2.3 结果与浅析28-34

    2.3.1 芦丁标准曲线28

    2.3.2 黄酮提取工艺的优化28-33

    2.3.3 紫外吸收光谱测定33

    2.3.4 黄酮提取物化学性质测定33-34

    本章小结34-36

    第三章 黄檗叶黄酮类化合物的纯化36-45

    引言36-37

    3.1 材料、试剂与仪器37-38

    3.1.1 材料37

    3.1.2 主要试剂37

    3.1.3 主要仪器37-38

    3.2 实验策略38-40

    3.2.1 石油醚、乙酸乙酯萃取38

    3.2.2 硅胶柱层析纯化38-39

    3.2.3 制备型高效液相纯化39

    3.2.4 Hplc 检测39-40

    3.2.5 质谱检测40

    3.2.6 核磁共振光谱40

    3.3 结果与浅析40-44

    3.3.1 硅胶柱层析纯化40-41

    3.3.2 反相高效液相的定性检测41-42

    3.3.3 制备型液相色谱分离黄酮单体42

    3.3.4 黄酮单体结构浅析42-44

    本章小结44-45

    第四章 黄檗叶黄酮功能的探讨45-57

    引言45

    4.1 材料、试剂与仪器45-46

    4.1.1 材料45

    4.1.2 试剂45-46

    4.1.3 主要仪器46

    4.2 实验策略46-48

    4.2.1 黄檗叶黄酮抗氧化活性测定46-47

    4.2.2 黄檗叶黄酮对 DNA 拓补异构酶的作用47

    4.2.3 MTT 法检测黄檗叶黄酮对肿瘤细胞增殖的影响47-48

    4.3 结果与浅析48-55

    4.3.1 FRAP 抗氧化能力试验结果48-50

    4.3.2 清除 DPPH·自由基能力试验结果50-52

    4.3.3 清除超氧阴离子自由基能力试验结果52-53

    4.3.4 黄檗叶黄酮对 DNA 拓补异构酶的作用53-55

    4.3.5 黄檗叶黄酮对肿瘤细胞增殖的影响55

    本章小结55-57

    第五章 总结与展望57-59

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