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摘要：目的探讨尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡Fas/FasL及Caspase信号途径的影响。策略取对数生长期HL-60细胞,分为：对照组(未加任何药物的HL-60细胞),NMDP(0.001g/L～0.100g/L)组,Ara-c(0.005g/L～0.500g/L)组,NMDP+Ara-c组,处理HL-60细胞24h。采取ATP化学发光法检测细胞增殖抑制率,选取NMDP浓度为0.050g/L、Ara-c浓度为0.010g/L为最适浓度,后分为：对照组(未加任何药物的HL-60细胞),NMDP组(浓度为0.050g/L), Ara-c组(浓度为0.010g/L),NMDP(0.050g/L)+Ara-c(0.010g/L)组。吖啶橙/溴化乙锭(A0/EB)染色、荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,且计数凋亡细胞,计算凋亡率。Western blotting策略检测细胞Fas及FasL蛋白的表达。Caspase3和Caspase8试剂盒检测Caspase3及Caspase8活性。结果1.细胞增殖抑制率：①与对照组比较,不同浓度NMDP (0.001～0.100g/L)组及Ara-c(0.005、0.500g/L)组细胞增殖抑制率差别均有显著性(FNMDP)=12231.563,FAra-c=6404.210,p=0.000)。②当NMDP浓度为0.050g/L、Ara-c浓度为0.010g/L时,细胞增殖抑制率最高,差别有极显著性(F=916.836,p=0.000)。2.细胞凋亡：①A0/EB染色：对照组细胞多呈均一绿色且细胞形态完整,NMDP组、Ara-c组及NMDP+Ara-c组均可见数量不等的核染色质呈橘红色、固缩状晚期凋亡细胞,且以NMDP+Ara-c组最多。②细胞凋亡率：对照组凋亡率为(5.021±0.391)%,NMDP组、Ara-c组及NMDP+Ara-c组分别为(14.203±1.204)%,(27.604±3.192)%,(54.929±11.598)%,均显著高于对照组(F=148.020,p=0.000)；Ara-c组凋亡率高于NMDP组(p0.05),但低于NMDP+Ara-c组。3.Fas蛋白表达：对照组Fas蛋白表达灰度扫描比值为(0.642±0.008),NMDP组、Ara-c组与NMDP+Ara-c组分别为(0.677±0.003),(0.716±0.005),(0.939±0.003),与对照组相比,三组均有统计学差别(F=1890.569,p=0.000)；Ara-c组Fas蛋白表达高于NMDP组(p=0.000),但低于NMDP+Ara-c组。4. FasL蛋白表达对照组FasL蛋白表达灰度扫描比值为(0.493±0.001), NMDP组、Ara-c组与NMDP+Ara-c组分别为(0.554±0.007),(0.605±0.001),(0.807±0.003),显著高于对照组(F=16065.218,p=0.000),且三组间相比亦有统计学差别(p=0.000),以NMDP+Ara-c组升高最显著。5.Caspase3活性：对照组Caspase3活性为(116699.000±72834.647)RLU, NMDP组、Ara-c组及NMDP+Ara-c组分别为(234964.333±32328.981)RLU,(614644.333±15958.413)RLU,(815261.000±91330.007)RLU,与对照组相比,三组均有统计学差别(F=85.045,p=0.000)；Ara-c组Caspase3活性高于NMDP组(p0.05),但低于NMDP+Ara-c组。6. Caspase8活性：对照组Caspase8活性为(5890.500±1523.108) RLU, NMDP组、Ara-c组及NMDP+Ara-c组细胞分别为(16135.000±140.714) RLU,(39399.000±1786.859)RLU,(66113.000±823.779)RLU,显著高于对照组(F=923.843,p=0.000)：Ara-c组Caspase8活性高于NMDP组(p0.05),而低于NMDP+Ara-c组。7.细胞凋亡与Fas/FasL蛋白表达：①Fas蛋白表达与细胞凋亡：Pearson相联系数为0.893,p=0.000,差别有显著性,Fas蛋白表达与凋亡呈强正线性相关。②FasL蛋白表达与细胞凋亡：Pearson相联系数为0.939,p=0.000,差别有显著性,FasL蛋白表达与凋亡呈强正线性相关。③Fas与FasL蛋白表达：Pearson相联系数为0.992,p=0.000,差别有显著性,Fas与FasL蛋白表达呈强正线性相关。8.细胞凋亡与Caspase活性：①Caspase3与细胞凋亡：Pearson相联系数为0.967,p=0.000,差别有显著性,Caspase3活性与凋亡呈强正线性相关。②Caspase8与细胞凋亡：Pearson相联系数为0.981,p=0.000,差别有显著性,Caspase8活性与凋亡呈强正线性相关。③Caspase3与Caspase8:Pearson相联系数为0.960,p=0.000,差别有显著性,Caspase3与Caspase8活性呈强正线性相关。9. Fas/FasL蛋白表达与Caspase活性：①Fas与Caspase3:Pearson相联系数为0.865,p=0.000,差别有显著性,Fas蛋白表达与Caspase3活性呈强正线性相关。②Fas与Caspase8:Pearson相联系数为0.942,p=0.000,差别有显著性,Fas蛋白表达与Caspase8活性呈强正线性相关。③FasL与Caspase3:Pearson相联系数为0.905,p=0.000,差别有显著性,FasL蛋白表达与Caspase3活性呈强正线性相关。④FasL与Caspase8:Pearson目联系数为0.971,p=0.000,差别有显著性,FasL蛋白表达与Caspase8活性呈强正线性相关。结论1.尼莫地平能协同阿糖胞昔推动HL-60细胞增殖抑制,NMDP(0.001～0.050g/L)及Ara-c(0.005～0.010g/L)范围内均呈浓度依赖性。当NMDP浓度为0.050g/L、Ara-c浓度为0.010g/L时,细胞增殖抑制率最高。2.尼莫地平能协同阿糖胞苷增强HL-60细胞Fas和FasL蛋白表达,Fas及FasL蛋白表达与细胞凋亡呈强正线性相关,提示其凋亡机制可能与上调Fas与FasL蛋白表达有关。3.尼莫地平能协同阿糖胞苷增强HL-60细胞Caspase3和Caspase8活性,Caspase3及Caspase8活性与细胞凋亡呈强正线性相关,提示其凋亡机制可能与增强Caspase3及Caspase8活性有关。4、Fas及FasL蛋白表达与Caspase3及Caspase8活性亦呈强正线性相关,提不Fas/FasL蛋白参与尼莫地平协同阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡可能是通过Caspase途径完成的。关键词：尼莫地平论文细胞凋亡论文HL-60细胞论文Fas/FasL论文Caspase3论文Caspase8论文
摘要2-5
Abstract5-9
縮略词索引表9-11
引言11-12
第一章 材料与策略12-18
1.1 材料12-13
1.2 策略13-18
第二章 结果18-27
2.1 各组HL-60细胞增殖比较18
2.2 各组细胞形态及凋亡率比较18
2.3 各组Fas/FasL蛋白表达18-19
2.4 各组Gaspase3、 CaspaseS活性19
2.5 细胞凋亡与Fas/FasL蛋白表达19
2.6 细胞凋亡与Caspase活性19-20
2.7 Fas/FasL蛋白表达与Gaspase活性20-27
第三章 讨论27-30
第四章 结论30-31