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摘要：背景及目的：随着人口老龄化和不良生活方式影响，动脉粥样硬化性肾动脉狭窄已成为肾动脉梗阻的首要理由，并最终导致终末期肾脏病（end stage renal disease，ESRD）。探讨发现动脉粥样硬化所致肾动脉狭窄程度与肾损伤严重程度并非完全平行，推测其所致慢性肾损伤可能与血管狭窄以外的其他因素有关，如炎症反应、动脉粥样硬化斑块稳定性。不规则趋化因子（Fractalkine，FKN）具有粘附活性，参与白细胞的游走和活化。由内皮细胞释放的趋化因子FKN与表达在自然杀伤细胞(NK)细胞、单核细胞、淋巴细胞上的受体CX3CR1结合后，可推动动脉粥样硬化的形成和影响动脉粥样硬化斑块的稳定性。此外，FKN在原发性和继发性肾脏疾病等多种炎症性疾病中表达上调，并通过介导炎症细胞的趋化和粘附发挥促炎症反应的重要作用，但目前尚未见动脉粥样硬化性肾动脉狭窄炎症性肾损害与FKN相关性报道。抗高血压药物具有降低动脉压，减少靶器官损伤的作用，但其在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄中的运用尚有着争议，它是否可通过干预FKN和CX3CR1的表达而减轻炎症性肾损伤，值得我们进一步探讨。为此，我们采取高脂饮食、一肾一夹、两肾一夹策略复制动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄模型，通过测定肾功能及血浆肾素活性（PRA）的变化和测定肾动脉狭窄侧肾脏FKN及其受体CX3CR1的分布及量的变化，探讨FKN/CX3CR1与动脉粥样硬化炎症性肾损害之间的相关性及直接肾素抑制剂阿利吉仑、Ang II受体抑制剂厄贝沙坦、钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平对其损伤的干预作用，为动脉粥样硬化性肾动脉狭窄肾损害的合理治疗提供论述基础。策略：1、动物模型的建立：将78只雄性SD大鼠随机分为一肾一夹（1K1C）组、二肾一夹（2K1C）组及检测手术组，1K1C组及2K1C组采取平行针灸针缩窄法建立肾动脉狭窄，检测手术组则只暴露肾动脉，不做狭窄造模，对造模失败的大鼠进行淘汰。三组大鼠均予注射VitD350万IU/kg并高脂饲养（10%猪油+5%白糖+2%胆固醇+0.5%胆酸钠）10周建立动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄动物模型。2、阿利吉仑、厄贝沙坦、氨氯地平对动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄大鼠抗炎症性肾脏保护作用的比较探讨:饲养10周后，将对照组及满足实验要求的1K1C组、2K1C组大鼠根据采取的干预措施随机分组：生理盐水组（0.9%NS2ml/d）、阿利吉仑组（50mg/kg·d）、厄贝沙坦组（100g/kg·d）、苯磺酸氨氯地平组（6mg/kg·d），干预4周后处理大鼠，分为以下几个部分进行实验：（1）心脏采血后全自动生化浅析仪检测血肌酐，放射免疫法检测血浆肾素活性（Plaa rennin activity，PRA）；（2）游离并切取SD大鼠狭窄侧肾脏，一部分石蜡包埋做PAS染色；一部分-70℃冷冻保存；（3）免疫组织化学法检测FKN及其受体CX3CR1的表达：取狭窄侧肾脏石蜡切片，采取SABC法，分别检测FKN、CX3CR1在狭窄侧肾脏的表达变化，以PBS代替一抗作阴性对照，出现棕区域为阳性结果。图像采集后用Image-pro plus6.0软件浅析，比较各组的平均光密度值（Mean optical density，MOD）；（4）RT-PCR法检测FKN mRNA及CX3CR1mRNA的表达：取冷冻保存的肾脏组织经RNA提取、逆转录、PCR、电泳后用Quangtity one软件浅析目的条带和内参条带的灰度值，比较FKN及CX3CR1在各组大鼠狭窄侧肾脏的表达变化。结果：1、三种降压药物对实验大鼠血压的影响：各组SD大鼠在药物干预四周后，同种造模方式下，药物干预组较生理盐水组血压显著下降，差别具有显著性（P0.05）,但各种药物降压效果差别不显著。2、三种降压药物对实验大鼠肾功能的影响：各组大鼠喂养14周后，同种造模方式下，2K1C阿利吉仑组与2K1C厄贝沙坦组较生理盐水血肌酐升高水平显著下降，差别有显著性（P0.05），其中，阿利吉仑组较厄贝沙坦组下降更显著（P0.05）。阿利吉仑并未引起1K1C组肌酐的升高，而1K1C厄贝沙坦组肌酐则显著升高。阿利吉仑组与氨氯地平组组间比较差别亦具有显著性(P0.05)。3、三种降压药物对实验大鼠血浆PRA分泌的调控作用：各组大鼠血浆肾素水平在进行干预处理后，2K1C生理盐水组较检测手术生理盐水组PRA显著升高（P0.05）；同种造模方式下，阿利吉仑组较生理盐水组PRA显著下降（P0.05），而2K1C、1K1C氨氯地平组则显著升高（P0.05）；阿利吉仑组与氨氯地平组组间比较差别亦有统计学作用（P0.05），而厄贝沙坦组与氨氯地平组间比较差别不显著（P0.05）。4、三种降压药物对实验大鼠肾脏FKN、CX3CR1表达的干预效应：1K1C、2K1C生理盐水组较检测手术生理盐水组FKN及CX3CR1在肾小管的表达均显著增加（P0.05），同种造模方式下，阿利吉仑组、厄贝沙坦组、氨氯地平组较生理盐水组FKN及CX3CR1的表达量下调（P0.05），以2K1C阿利吉仑组下调尤为显著，而2K1C厄贝沙坦组与2K1C氨氯地平组比较差别亦具有显著性（P0.05），2K1C阿利吉仑组较1K1C阿利吉仑组FKN及CX3CR1表达量减少较显著（P0.05）。5、RT-PCR法检测FKN mRNA及CX3CR1mRNA的表达，以目的条带灰度值/内参条带灰度值表示，阿利吉仑组与厄贝沙坦组较生理盐水组FKN及CX3CR1表达均显著下降（P＜0.05），而氨氯地平1K1C和2K1C组表达比较差别并无统计学作用（P0.05），与免疫组化结果一致。结论：1、炎症因素可能参与了动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄肾损伤历程。2、阿利吉仑可能通过下调FKN/CX3CR1的表达发挥肾脏保护作用。3、与厄贝沙坦、苯磺酸氨氯地平相比，阿利吉仑可能在动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄抗炎症性肾脏保护作用中具有优越性。关键词：直接肾素抑制剂论文AT1受体拮抗剂论文钙通道阻滞剂论文动脉粥样硬化论文肾动脉狭窄论文Fractalkine论文CX3CR1论文炎症性肾损伤论文
摘要4-8
ABSTRACT8-15
前言15-18
材料和策略18-30
结果30-40
讨论40-46
结论46-47