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谈述胰蛋白酶类胰蛋白酶和类糜蛋白酶表达在过敏性反应死亡和冠心病猝死中法医学作用

收藏本文 2024-02-28 点赞:33376 浏览:141905 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:探讨背景过敏性反应是典型的Ⅰ型超敏反应,是超敏反应中发病最急、病情最危重的疾病。虽然过敏性疾病一直是临床医学探讨的热点,国内外学者就其发病机制、临床诊断和临床治疗做了大量探讨。但在法医学实践中,过敏性反应死亡尸体常无特异性病理学转变,诊断往往根据过敏史、临床体现及非特异性形态学转变等(如肺水肿、多器官淤血、嗜酸性粒细胞浸润),且排除损伤、窒息和中毒等其他因素后才能得出结论,由此给法医学死因鉴定带来很大困难。而且在法医学鉴定中因其他理由猝死者(如冠心病猝死),在不典型的情况下,也常常被怀疑为过敏性反应死亡。肥大细胞是人类速发型过敏反应的起始细胞,肥大细胞激活后可释放出大量的促炎症介质,如类胰蛋白酶、类糜蛋白酶、糖蛋白、组胺、十二烷类以及细胞因子等,类胰蛋白酶(trypase)是一种中性丝氨酸蛋白酶,是储有着肥大细胞颗粒中最丰富的一种介质,占肥大细胞总蛋白的20%,几乎只由组织肥大细胞释放。而类糜蛋白酶(chymase)是肥大细胞分泌的另一种蛋白酶,占肥大细胞总蛋白的3%,在过敏、缺血、损伤等情况下经脱颗形成分泌到细胞外基质中。近年来探讨表明类胰蛋白酶和类糜蛋白酶分子量大于其他致过敏性反应的介质,且其理化性质稳定,由此,类胰蛋白酶和类糜蛋白酶被认为是肥大细胞脱颗粒的重要标志,也是法医鉴定过敏死的相对可靠指标。然而,类胰蛋白酶增高并不一定仅出现在过敏反应中,据国外文献报道,一例非过敏死亡的病人,其血中类胰蛋白酶高达106ng/mL。近年来有学者发现,动脉粥样硬化、注射死亡、创伤导致死亡、婴幼儿猝死综合征尸体心血中类胰蛋白酶也有不同程度的升高。最近探讨发现,肥大细胞不仅参与过敏反应,而且在起始免疫和免疫调节方面也发挥着重要的作用。在心血管疾病患者中,肥大细胞可诱导心肌细胞凋亡及成纤维细胞、血管内皮细胞等非心肌细胞增殖,能强有效的推动血管新生,在心管疾病中发挥着重要的作用。冠心病猝死发生迅速,尸体常无特异性病理学转变,组织、血清中也有较多类胰蛋白酶表达,这些使得对类胰蛋白酶等参与过敏死的判断变得更为复杂,调查非过敏死者的肥大细胞反应,便成为鉴定过敏死或排除其它死因的重要鉴别手段。目的目前关于冠心病和过敏反应死亡死者心脏、肺脏肥大细胞及血清类胰蛋白酶含量的比较探讨,国内外均罕见报道。为此,我们运用免疫组化和图像浅析技术来定性和半定量检测类胰蛋白酶和类糜蛋白酶在过敏反应死亡和冠心病猝死心肺组织中的表达变化,浅析尸体心血类胰蛋白酶含量以探讨类胰蛋白酶、类糜蛋白酶在过敏反应死亡中的作用及其与过敏反应死亡和冠心病猝死的联系,为过敏反应死亡的病理诊断和法医学鉴定提供科学依据。材料和策略1.嗜酸粒细胞半定量结果的判断据200倍物镜下嗜酸粒细胞的个数,对来自12例过敏性反应死亡样本的喉头、肺和肠组织过敏反应程度进行半定量判定:阴性(无嗜酸粒细胞)或弱阳性(+,嗜酸粒细胞20个)判断为低致敏反应程度;中等强度阳性(++,20个≤嗜酸粒细胞40个)或者强阳性(+++,嗜酸粒细胞≥40)判断为高致敏反应程度。2.类胰蛋白酶和类糜蛋白酶各组心和肺组织中的定量表达特点用免疫组织化学SP策略检测类胰蛋白酶和类糜蛋白酶在12例过敏性反应死亡、20例冠心病猝死、20例有冠脉粥样硬化但死因为非心脏性疾病和20例无显著冠脉粥样硬化且死因为非心脏性疾病死亡心和肺组织中的表达,用Image-pro plus图像浅析技术测试类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的光密度值(Optical density, OD),浅析不同死因心和肺组织中类胰蛋白酶和类糜蛋白酶表达强度的变化规律。3.尸体血清中IgE和类胰蛋白酶的测定收集已检测尸体血清中IgE和类胰蛋白酶含量的21例过敏反应死亡、26例心血管疾病死亡和14例非心血管疾病死亡的资料,浅析不同死亡理由尸体血清中IgE和类胰蛋白酶的含量的变化规律。4.统计学浅析用SPSS13.0软件进行统计学浅析。各组检测数据以均数±标准差(X±s)或中位数[最小值—最大者](M[Min-Max)表示。数据分布的正态性浅析采取Shapiro-wilk正态性检验;对于正态分布数据,用方差齐性浅析进一步检验相应样本的总体方差;若方差齐,组间多重比较采取LSD;若方差不齐,组间的多重比较采取Dunnett'sT3检验。两组间的比较采取独立样本t检验;非参数检验采取x2检验;对于偏态分布数据,多组间的比较采取多个独立样本非参数检验(K Independent Samples Test),两组间的比较采取两独立样本非参数检验(Mann-Whitney U)。非参数检验采取χ2检验。所有统计学结果以P0.05认为有统计学作用。结果1.嗜酸粒细胞在过敏反应死亡不同组织中的浸润情况:嗜酸粒细胞个数在过敏反应死亡组喉头、肺和肠三个器官之间的差别具有统计学作用(x2=6.623,P=0.036),而且肺和肠内嗜酸性粒细胞浸润的数目高于喉头。2.类糜蛋白酶和类胰蛋白酶在肺脏中的表达情况:(1)类糜蛋白酶OD值在阴性对照组、冠心病组、冠心病猝死组、过敏死亡组中分别是0.019±0.003,0.049±0.004,0.049±0.004,0.049±0.004。OD值在上面陈述的各组别中有差别(F=309.566,,P=0.000),其中SCD组、CHD组和过敏性性反应死亡组均大于阴性对照组(P=0.000),CHD组与SCD组、CHD组与过敏性反应死亡组和SCD组与过敏性反应死亡组两两比较均无统计学作用(P=0.942,P=0.965和P=0.985)。(2)类胰蛋白酶OD值在阴性对照组、冠心病组、冠心病猝死组、过敏死亡组分别是0.045±0.048,0.171±0.020,0.220±0.019,0.289±0.031,各组间OD值有差别(P=174.876.P=0.000),且两两比较差别均具有统计学作用(P=0.000)。3.类胰蛋白酶在心脏中的表达情况:(1)在左心室组织中类胰蛋白酶OD值阴性对照组、过敏死亡组、冠心病组及冠心病猝死组在左室壁中依次升高,分别为0.019±0.008,0.035±0.005,0.049±0.007,0.107±0.358,各组之间比较有差别(F=290.122,P=0.000),并且两两比较差别均具有统计学作用(P=0.000);左冠状动脉狭窄程度小于Ⅲ级、等于Ⅲ级、大于等于Ⅳ级分别为0.025+0.010,0.070±0.030,0.088±0.031,组间比较有差别(F=52.624,P=0.000),左冠状动脉狭窄程度等于Ⅲ级、大于等于Ⅳ级均大于左冠状动脉狭窄程度小于Ⅲ级(P=0.000,P=0.000),左冠状动脉狭窄程度等于Ⅲ级、大于等于Ⅳ级组两两比较无统计学作用(P=0.212)。(2)在左前降支周围类胰蛋白酶OD值阴性对照组、过敏死亡组、冠心病组及冠心病猝死组分别为0.030±0.010,0.047±0.005,0.064±0.009,0.114±0.035,,组间比较有差别(F=187.593,P=0.000),并且上面陈述的组别两两比较差别均具有统计学作用(P=0.000);类胰蛋白酶OD值在左冠状动脉狭窄程度小于Ⅲ级、等于Ⅲ级、大于等于Ⅳ级分别为0.036±0.012,0.084±0.027,0.094±0.030,组间比较有差别(F=56.350,P=0.000),其中左冠状动脉狭窄程度等于Ⅲ级、大于等于Ⅳ级均大于左冠状动脉狭窄程度小于Ⅲ级(P=0.000,P=0.000),左冠状动脉狭窄程度等于Ⅲ级、大于等于Ⅳ级组两两比较无统计学作用(P=0.592)。(3)阴性对照组、冠心病组、冠心病猝死组、过敏死亡组四个组之间类胰蛋白酶的表达差别具有统计学作用(F=258.455,P=0.000);肺脏和心脏两个不同器官之间类胰蛋白酶的表达差别也具有统计学作用(F=1047.839,P=0.000);分组和器官之间的交互效应也具有统计学作用(F=120.774,P=0.000)。4.尸体血清中IgE和类胰蛋白酶在不同组别的差别浅析:(1)血清中IgE含量在过敏反应组、心血管疾病组和非心血管疾病组分别为104.000[27.200~915.700]、116.5001[2.400~278.000]和6.250[2.200~20.000],组间比较差别有统计学作用(χ2=16.000,P=0.000),根据平均秩次进一步推断,血液中IgE含量以过敏反应组最高,心血管疾病组次之,非心血管疾病组最低。(2)血清中类胰蛋白酶含量在过敏反应组、心血管疾病组和非心血管疾病组分别为80.700[2.290-667.600]、15.374[0.000-36.600]和6.150[2.100-10.600],组间比较差别有统计学作用(χ2=26.667,P=0.000),根据均数,血清中类胰蛋白酶含量以过敏反应组最高,心血管疾病组次之,非心血管疾病组最低。结论1.嗜酸性粒细胞浸润数目的增加在诊断过敏反应死亡中具有重要的参考价值。2Chymase在过敏性反应死亡组、冠心病组及冠心病猝死组肺脏内表达的OD值升高,高于阴性对照组,但是由于Chymase仅占肥大细胞总蛋白的3%,表达量较少,而且含类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的MCTC主要有着于皮肤和小肠粘膜下,过敏性反应死亡组、冠心病组及冠心病猝死组肺脏内的表达无统计学作用。3Tryptase在阴性对照组、冠心病组、冠心病猝死组、过敏性死亡组肺脏中表达的OD值依次升高,并且上面陈述的组别两两比较差别均具有统计学作用;在阴性对照组、过敏性反应死亡组、冠心病组及冠心病猝死组心脏中表达的OD值依次升高,并且上面陈述的组别两两比较差别均具有统计学作用。Tryptase尸体血清中的含量在过敏死亡和心血管疾病死亡两种死因中的差别也具有统计学作用。Tryptase可以为过敏反应死亡和冠心病猝死的鉴别诊断提供科学依据。4.IgE尸体血清中的含量在过敏死亡和心血管疾病死亡两种死因的差别没有统计学作用,提示我们诊断过敏性反应时还需结合其他指标。关键词:过敏性反应论文冠心病猝死论文类胰蛋白酶论文类糜蛋白酶论文免疫组织化学论文

    摘要3-8

    ABSTRACT8-17

    前言17-28

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