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分析级别中心体γtubulin、Nek2与染色体异常和乳腺癌发生进展联系

收藏本文 2023-12-18 点赞:16282 浏览:63627 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:工作目的本探讨通过细胞生物学、分子生物学和遗传学手段,浅析中心体γ-tubupn及其调控因子Nek2在乳腺上皮恶变历程中各阶段的表达变化,结合相关染色体变化与乳腺癌的联系,探讨乳腺癌发生演变机制,为早期癌变浸润基因治疗靶点的筛选提供论述依据。探讨策略选取正常乳腺组织、不典型增生、高低级别导管内癌、高低级别浸润性导管癌组织6组共210例样本,采取免疫组化技术和流式细胞免疫荧光技术分别定性、半定量、定量检测中心体γ–tubupn和Nek2蛋白表达水平及浅析其作用;采取地高辛标记mRNA原位杂交技术和实时定量反转录PCR技术分别定性、半定量、定量检测γ–tubupn和Nek2mRNA表达水平及浅析其作用;采取比较基因组杂交技术,检测染色体DNA拷贝数增益和或缺失情况,并浅析染色体异常区段相关基因变化。探讨结果在正常乳腺组织,不典型增生,导管内癌和浸润性导管癌这个进展进程中,中心体γ-tubupn和Nek2的蛋白和mRNA表达水平呈上升走势,在浸润性导管癌和导管内癌中显著增加。γ-tubupn和Nek2的表达呈正相关性。DNA异倍体组中γ-tubupn和Nek2的表达量显著高于DNA二倍体组。γ-tubupn中/高表达组染色体DNA异常变化数显著多于γ-tubupn阴性/低表达组。过半数不典型增生样本中γ-tubupn和Nek2的蛋白及mRNA的表达水平高,且与低级别癌样本中的表达水平无显著差别。低级别癌的染色体平均增益数、缺失数及总的变化数均显著低于高级别癌,但是与浸润性癌之间差别无显著性。不典型增生样本中染色体异常水平显著高于癌组织样本,与低级别癌样本有共同的变化位点。高级别原位癌和浸润性癌具有相同的染色体及其位点的遗传学异常,有多个共同的缺失位点。结论中心体γ-tubupn和Nek2的蛋白和mRNA异常表达可能在促使乳腺细胞过度增殖、恶变和转化的历程中起重要作用,它们可做为早期癌变浸润基因治疗的潜在靶点;不典型增生的细胞遗传学变化先于形态学上的转变,可能与低级别癌发存活在密切的遗传学联系,是潜在癌前驱病变;低级别癌和高级别癌有不同的分子遗传学转变,可能有各自的进展途径。关键词:中心体γ-tubupn论文Nek2论文染色体异常论文乳腺癌论文不典型增生论文低级别癌论文高级别癌论文

    摘要3-4

    ABSTRACT4-10

    第一章 文献综述10-24

    1.1 乳腺癌发生进展探讨进展概述10-15

    1.1.1 乳腺癌前病变的探讨进展10-12

    1.1.2 乳腺癌发生进展方式的认识与进展12-14

    1.1.3 乳腺癌亚型分型的探讨14-15

    1.2 中心体及其与肿瘤相关性探讨进展15-17

    1.2.1 中心体的结构与功能15-16

    1.2.2 中心体异常与肿瘤的联系16-17

    1.3 中心体调控因子与乳腺癌探讨进展17-19

    1.3.1 中心体相关激酶17-18

    1.3.2 泛素—蛋白酶体途径相关物质18

    1.3.3 相关癌基因/抑癌基因及其表达产物18-19

    1.4 Nek2 及其与中心体和肿瘤的探讨进展19-20

    1.4.1 Nek2 的发现和其蛋白结构19

    1.4.2 Nek2 对中心体的调节作用19

    1.4.3 Nek2 与肿瘤的相关性19-20

    1.4.4 Nek2 的剪接异构体20

    1.5 染色体拷贝数异常与乳腺癌20-22

    1.5.1 比较基因组杂交技术与肿瘤20-21

    1.5.2 乳腺不同病变中染色体拷贝数的异常21

    1.5.3 乳腺DCIS染色体拷贝数异常的特点21-22

    1.6 本论文的选题思路、主要内容和探讨作用22-24

    第二章 中心体γ -tubupn 和 Nek2 免疫组织化学检测24-42

    2.1 引言24-26

    2.2 材料与策略26-30

    2.2.1 实验样本26-28

    2.2.2 实验试剂28

    2.2.3 实验仪器设备28

    2.2.4 实验策略28-29

    2.2.5 评判标准和统计学浅析29-30

    2.3 结果与讨论30-39

    2.3.1 γ -tubupn 蛋白表达免疫组化检测30-33

    2.3.2 Nek2 蛋白表达免疫组化检测33-36

    2.3.3 γ-tubupn 和 Nek2 蛋白表达免疫组化检测结果的比较36

    2.3.4 DCIS 和 IDC 中γ -tubupn 和 Nek2 蛋白表达与分子亚型36-38

    2.3.5 γ -tubupn 蛋白免疫组化染色显示中心体的异常38-39

    2.4 小结39-42

    第三章 中心体γ -tubupn 和 Nek2 流式免疫荧光定量表达和 DNA 倍性流式细胞术浅析42-61

    3.1 引言42-43

    3.2 材料与策略43-46

    3.2.1 实验样本43

    3.2.2 实验试剂43-44

    3.2.3 实验仪器设备44

    3.2.4 实验策略44-45

    3.2.5 评判标准和统计学浅析45-46

    3.3 结果与讨论46-59

    3.3.1 流式细胞术 DNA 倍体测定的结果46-48

    3.3.2 各组样本 DNA 含量及异倍体出现率48-50

    3.3.3 γ -tubupn 流式细胞术免疫荧光检测结果50-53

    3.3.4 Nek2 流式细胞术免疫荧光检测结果53-56

    3.3.5 γ -tubupn 和 Nek2 免疫荧光定量检测组间变化和组内差别56-57

    3.3.6 免疫荧光定量和免疫组化半定量检测结果的比较57-59

    3.4 小结59-61

    第四章 中心体γ -tubupn 和 Nek2mRNA 表达原位杂交检测61-76

    4.1 引言61-62

    4.2 材料与策略62-66

    4.2.1 实验样本62

    4.2.2 实验试剂62

    4.2.3 实验仪器设备62-63

    4.2.4 实验策略63-66

    4.2.5 评判标准和统计学浅析66

    4.3 结果与讨论66-74

    4.3.1 γ -tubupn mRNA 表达原位杂交检测结果66-69

    4.3.2 Nek2mRNA 表达原位杂交检测结果69-72

    4.3.3 γ -tubupn 和 Nek2 两指标 mRNA 表达阳性率比较72-73

    4.3.4 γ -tubupn 和 Nek2 两指标免疫组化和原位杂交结果比较73-74

    4.4 小结74-76

    第五章 中心体γ -tubupn 和 Nek2mRNA 实时定量 RT-PCR 检测76-93

    5.1 引言76-78

    5.2 材料与策略78-82

    5.2.1 实验样本78

    5.2.2 实验试剂78

    5.2.3 实验仪器设备78-79

    5.2.4 实验策略79-82

    5.2.5 数据处理和统计学浅析82

    5.3 结果与讨论82-91

    5.3.1 提取总 RNA 质量的测定82-83

    5.3.2 荧光实时定量 PCR 扩增反应结果83-84

    5.3.3 各种样本组间γ -tubupn mRNA 表达量的比较84-86

    5.3.4 六组样本 Nek2 mRNA 表达量的比较86-87

    5.3.5 六组样本γ -tubupn 和 Nek2 mRNA 两指标定量表达的比较87-88

    5.3.6 六组样本两个指标各自 mRNA 半定量和定量表达走势的比较88-89

    5.3.7 六组样本两个指标各自蛋白和 mRNA 定量表达的比较89-91

    5.4 小结91-93

    第六章 乳腺癌及癌前病变染色体 DNA 拷贝数变化及与γ -tubupn 表达的相关性93-137

    6.1 引言93-94

    6.2 材料与策略94-104

    6.2.1 实验样本94

    6.2.2 实验试剂94-96

    6.2.3 实验仪器设备96-97

    6.2.4 实验策略97-103

    6.2.5 评判标准和统计学浅析103-104

    6.3 结果与讨论104-134

    6.3.1 CGH 浅析结果观察104-107

    6.3.2 每例染色体的增益、缺失和总的变化数107-110

    6.3.3 低级别癌中比较染色体的异常转变110-114

    6.3.4 高级别癌中比较染色体的异常转变114-122

    6.3.5 ADH 和 LG-DCIS、LG-IDC 染色体的异常的比较122-127

    6.3.6 γ -tubupn 不同程度表达组中染色体的异常转变127-134

    6.4 小结134-137

    第七章 探讨工作总结革新点展望137-141

    7.1 探讨工作总结137-138

    7.2 主要革新点138-139

    7.3 不足与展望139-141

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