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摘要：β-防御素Galpnacin-3(Gal 3)是鸡体内最的抗菌肽,除了具有的杀菌、抗病毒作用外,它还参与机体免疫反应,有重大的开发利用潜力。构建了表达鸡β-防御素的大肠杆菌系统、研究了重组鸡β-防御素在大肠杆菌系统中高表达规律和复性工艺,为规模化生产建立了技术基础。本试验共分三:①鸡β-防御素的克隆 编码Gal 3的cDNAPCR法引入酶切位点,与pGEM-T载体连接后再分别亚克隆至大肠杆菌表达载体pGEX6p-1、pQE30、pET30a和pET22b中,构建了表达Gal 3-GST融合蛋白和不同形式Gal 3-His融合蛋白的大肠杆菌表达系统。②重组鸡β-防御素在大肠杆菌中表达规律的研究 小量诱导试验,携带Gal 3-pGEX6p-1质粒的大肠杆菌于32kD左右出现一条新的蛋白质条带,而其它类型的重组菌不表达目的蛋白。融合蛋白的产量占细菌总蛋白的35%左右,主要以包涵体形式存在。加入诱导剂1h时,开始有可检出量重组蛋白质的表达,在2h时其表达已接近最大量;诱导剂IPTG在0.2-1.2mmol/ml范围内,对重组蛋白的产量影响。⑦重组鸡β-防御素的复性工艺研究将重组大肠杆菌经IPTG诱导所产生的包涵体用8mol/L尿素溶解后,分步稀释于含有氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽的系统中复性。利用这一系统,约30%的重组蛋白质能完全复性。,重组鸡Gal3在12μg/ml时,能抑制肠炎沙门氏菌的生长,在24μg/ml时可抑制肠致病型大肠杆菌的生长。关键词：鸡β-防御素论文基因重组论文蛋白质复性论文抑菌作用论文
摘要4-5
前言5-11
-防御素表达质粒的构建11-21
1.实验11-14
2.实验方法14-17
3.实验结果17-19
4.分析与讨论19-21
重组-防御素在大肠杆菌中表达规律的研究21-31
1.实验21-24
2.试验方法24-25
3.实验结果25-29
4.分析与讨论29-31
重组-防御素的复性工艺研究31-37
1.实验31-32
2.试验方法32-33
3.实验结果33-35
4.分析与讨论35-37
全文37-38