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新型抗菌剂在贻贝微生物制约中应用

收藏本文 2024-03-05 点赞:6144 浏览:20345 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:为了寻找新型抗菌剂,了解其抗菌效果及在水产品保鲜中的实际应用能力,对新合成的两种抗菌CP251和CP252的抗菌性能了研究,并和DTPA比较,同时将它们应用到贻贝的保鲜中。确定了MIDI Sherlock系统的最佳鉴定方法。接着用确定的最佳方法传统的生理生化鉴定方法对贻贝中存在的优势菌鉴定,选取贻贝中最为常见的腐败菌——枯草芽孢杆菌、典型的革兰氏阳性菌——金葡萄球菌和革兰氏阴性菌——铜绿检测单胞菌对新型抗菌剂CP251和CP252的抗菌效果测定并和DTPA比较。然后对这三种抗菌剂MTT实验,并应用到贻贝的保鲜中去。MIDI Sherlock系统的鉴定结果,贻贝中以芽孢杆菌属和弧菌属为主;且当获菌量在10~0~120mg,并使用MIDI推荐的TSBA培养基时,鉴定的准确度——系数(similarity index, SI)最高,在0.802~0.805之间,远远大于系统的推荐值0.5。抑菌实验结果,DTPA和CP251对金葡萄球菌和铜绿检测单胞菌的抑制效果要好于CP252。当CP251的浓度为450ppm和10~0ppm时,基本上已经完全抑制了金葡萄球菌和铜绿检测单胞菌的生长;而CP252在上述两个浓度时才使它们的菌液浓度下降了一个数量级。对于枯草芽孢杆菌,DTPA的抑制效果要远远超过CP251和CP252。DTPA在1500ppm时就使它的菌液浓度下降了四个数量级,从4.5×10~7 cfu/mL下降到1.4×10~3 cfu/mL;而CP251和CP252在3000ppm的时候才表现出的抑制作用。对这三种抗菌剂MTT实验后得知,它们对细胞的平均相对抑制率都不到10~%,分别是:DTPA为6.75%,CP251为3.05%,CP252为7.90%,将它们应用到贻贝的保鲜中,结果,DTPA的抑制效果最好,使贻贝中的菌落总数减少了69%,从9.4×10~4 cfu/mL下降到2.9×10~4 cfu/mL;CP251次之,它使贻贝中的菌落总数减少了一半左右,从9.4×10~4 cfu/mL下降到4.8×10~4 cfu/mL;CP252效果最差,减少的菌落总数不到20%。关键词:MIDI论文Sherlock系统论文贻贝论文抗菌论文铁离子螯合剂论文MTT实验论文

    摘要4-5

    Abstract5-9

    引言9-10

    1 绪论10-19

    1.1 天然抗菌剂10-12

    1.1.1 壳聚糖衍生物10-11

    1.1.2 微生物类11-12

    1.2 有机抗菌剂12-15

    1.2.1 季铵盐类抗菌剂12

    1.2.2 季鏻盐抗菌剂12-13

    1.2.3 其他13-15

    1.3 无机抗菌剂15-16

    1.3.1 银系抗菌剂15-16

    1.3.2 纳米 TiO_2 抗菌剂16

    1.4 微生物鉴定的研究现状16-18

    1.5 贻贝保鲜的研究18

    1.6 本课题的研究思路和路线18-19

    2 MIDI 微生物自动鉴定系统鉴定方法的建立19-32

    2.1 19-21

    2.1.1 菌株19

    2.1.2 试剂及配制19-21

    2.1.3 仪器与设备21

    2.2 方法21-27

    2.2.1 Sherlock 鉴定系统鉴定蜡样芽孢杆菌21-25

    2.2.2 传统生理生化鉴定蜡样芽胞杆菌25

    2.2.3 不同培养基对蜡样芽胞杆菌MIDI 鉴定结果影响实验25

    2.2.4 不同取量对蜡样芽胞杆菌MIDI 鉴定结果影响实验25

    2.2.5 PCR 菌种鉴定方法鉴定蜡样芽胞杆菌25-27

    2.3 结果与讨论27-32

    2.3.1 MIDI 鉴定系统推荐方法的鉴定蜡样芽胞杆菌结果27-28

    2.3.2 不同培养基对蜡样芽胞杆菌MIDI 鉴定结果的影响28-29

    2.3.3 不同取菌量对蜡样芽胞杆菌MIDI 鉴定结果的影响29

    2.3.4 蜡样芽胞杆菌的生理生化鉴定29-30

    2.3.5 PCR 鉴定蜡样芽胞杆菌结果30

    2.3.6 讨论30-32

    3 贻贝中优势菌的分离与鉴定32-38

    3.1 、仪器及试剂的配制32-33

    3.1.1 与仪器32

    3.1.2 试剂的配制32-33

    3.2 方法33

    3.2.1 贻贝中优势菌的分离33

    3.2.2 贻贝中优势菌的生理生化鉴定33

    3.2.3 贻贝中优势菌的MIDI 方法鉴定33

    3.3 结果与讨论33-38

    3.3.1 贻贝中优势菌的分离结果33-34

    3.3.2 贻贝中优势菌的生理生化鉴定34-36

    3.3.3 贻贝中优势菌的MIDI 微生物自动鉴定系统鉴定结果36

    3.3.4 讨论36-38

    4 新型抗菌剂抗菌效果的研究38-46

    4.1 与试剂的配制38

    4.1.1 38

    4.1.2 试剂的配制38

    4.2 主要仪器与设备38-39

    4.3 方法39-40

    4.3.1 CP251、CP252 和DTPA 对金葡萄球菌、铜绿检测单胞菌和枯草芽孢杆菌抑制曲线的测定39

    4.3.2 滤纸片实验39-40

    4.4 结果与讨论40-46

    4.4.1 结果40-41

    4.4.2 讨论41-46

    5 新型抗菌剂的细胞毒实验46-55

    5.1 细胞培养前的准备工作47-48

    5.1.1 清洗47-48

    5.1.2 消毒48

    5.2 试剂的配制48-51

    5.3 与方法51-52

    5.3.1 51

    5.3.2 方法51-52

    5.4 结果与讨论52-55

    6 新型抗菌剂在贻贝保鲜中的应用55-59

    6.1 与方法55-57

    6.1.1 55

    6.1.2 方法55-57

    6.2 结果与讨论57-59

    6.2.1 结果57

    6.2.2 讨论57-59

    7 59-60

    7.1 59

    7.2 展望59-60

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