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Abstract5-17
章 胚胎干细胞研究进展17-37
1.1 胚胎干细胞概述17
1.2 胚胎干细胞研究中常用名词的17-18
1.2.1 ES 细胞（Embryonic Stem Cell，ES）17
1.2.2 EC 细胞（Embryonic Carcinoma Cell，EC）17
1.2.3 EG 细胞（Embryonic Germ Cell，EG）17-18
1.3 胚胎干细胞建系的研究历程18
1.4 胚胎干细胞建系路线18-19
1.4.1 依制备方法不同分类18
1.4.1.1 机械法18
1.4.1.2 免疫手术法18
1.4.2 依ES 细胞来源不同分类18-19
1.4.2.1 囊胚法18
1.4.2.2 胚胎原始生殖细胞（PGCs）法18
1.4.2.3 核移植细胞法18-19
1.5 建立和维持胚胎干细胞的条件19-23
1.5.1 饲养层19-20
1.5.2 培养基组成20
1.5.3 条件培养基20-21
1.5.4 细胞因子对ES 细胞的影响21-22
1.5.4.1 分化抑制因子??白血病抑制因子（LIF）21
1.5.4.2 干细胞生长因子（SCF）21-22
1.5.4.3 碱性成纤维细胞生长因子（bFGF-）22
1.5.4.4 其它生长因子22
1.5.5 增殖的ICM、胚胎干细胞的离散及扩大培养22-23
1.6 胚胎干细胞的生物学特性及鉴定方法23-25
1.6.1 形态和生长特征23
1.6.2 核型分析23
1.6.3 碱性磷酸酶（（Alkapne Phosphatase，P）活性测定23
1.6.4 胚胎干细胞特异性表面抗原的表达23
1.6.5 胚胎干细胞的端粒酶活性23-24
1.6.6 细胞冷冻和解冻24
1.6.7 转录因子Oct-4 的表达24
1.6.8 体内外分化能力鉴定24-25
1.7 人胚胎干细胞建系中存在的问题25-26
1.8 胚胎干细胞的分化研究26-29
1.8.1 ES 细胞分化研究的理论基础26-27
1.8.1.1 内源性因素26
1.8.1.2 外源性因素26-27
1.8.1.2.1 分化诱导26
1.8.1.2.2 分化抑制26-27
1.8.1.2.3 细胞外物质的介导作用27
1.8.2 ES细胞的分化研究现状27-28
1.8.2.1 向神经细胞的定向分化27
1.8.2.2 向造血细胞的定向分化27
1.8.2.3 向内皮细胞的定向分化27-28
1.8.2.4 向其它细胞定向分化的研究28
1.8.2.4.1 由小鼠ES细胞向其它细胞定向分化28
1.8.2.4.2 由蛙ES细胞向其它细胞定向分化28
1.8.2.4.3 由人ES细胞向其它细胞定向分化28
1.8.3 ES细胞在细胞替代治疗中的潜在应用价值28-29
1.8.3.1 血液系统疾病28
1.8.3.2 神经系统疾病28-29
1.8.3.3 肝脏疾病29
1.9 ES细胞分化研究尚需解决的问题29-31
1.9.1 定向诱导分化ES细胞为特定类型的功能细胞29
1.9.2 定向诱导分化ES细胞为有功能的器官29
1.9.3 定向诱导分化的可调性29-30
1.9.4 组织相容性问题30
1.9.5 ES细胞的遗传学稳定性问题30-31
.2.1.1 实验动物及细胞系382.2.1.2 主要化学试剂38-39
2.2.1.3 主要试剂39-40
2.2.1.4 实验用具40
2.2.1.5 主要仪器40
2.2.2 方法40-44
2.2.2.1 鼠胚成纤维细胞（PMEFs）的制备及培养40-41
2.2.2.1.1 Balb/c 鼠的交配40
2.2.2.1.2 PMEFs 的制备及培养40-41
2.2.2.2 PMEFs 生长分裂抑制的处理及冻存41-42
2.2.2.2.1 丝裂霉素 C 处理法41
2.2.2.2.2 γ-射线辐照处理法41-42
2.2.2.3 猕猴囊胚的42
2.2.2.4 猕猴胚胎干细胞（ES）的分离及培养42-43
2.2.2.5 ES 细胞培养一般程序43
2.2.2.6 ES 细胞克隆的消化分离及冻存43
2.2.2.7 猕猴胚胎干细胞核型的鉴定43-44
2.2.2.8 猕猴胚胎干细胞未分化特性—碱性磷酸酶（P）活性的测定44
2.2.2.9 猕猴胚胎干细胞多能性分化的初步分析44
2.3 结果与讨论44-56
2.3.1 囊胚的猕猴类胚胎干细胞的分离、培养和初步鉴定44-52
2.3.1.1 猕猴囊胚的44-47
2.3.1.2 猕猴类胚胎干细胞的分离和持续培养47-50
2.3.1.2.1 RS5 细胞的形态特征观察48-49
2.3.1.2.2 RS5 细胞的生长特征观察49-50
2.3.1.3 RS5 细胞核型的鉴定50
2.3.1.4 碱性磷酸酶活性的测定50-51
2.3.1.5 RS5 细胞多能性分化的初步分析51
2.3.1.6 讨论51-52
2.3.1.7 52
2.3.2 RS366.4 猕猴胚胎干细胞培养体系的建立52-56
2.3.2.1 PMEFs 的及处理52
2.3.2.2 培养基对 ES 细胞活性的影响52-53
2.3.2.3 冷冻剂对 PMEFs 及 ES 细胞活性的影响53
2.3.2.4 消化液及其消化方式对 ES 细胞扩增活性的影响53
2.3.2.5 不同培养时间ES 细胞的碱性磷酸酶活性测定53-54
2.3.2.6 体外定向分化实验的关键——类胚胎的54-55
2.3.2.7 55-56
.1.5 主要仪器1235.2.2 方法123-124
5.2.2.1 三种北醌化合物的生物合成、分离及结构鉴定123
5.2.2.2 Kirby-Bauer 纸片扩散法测定 EA、HA、HB 抗菌生物活性123-124
5.2.2.3 R366.4 细胞的光敏细胞毒性测定124
5.2.2.4 EA、HA 及 HB 对 Hce-8693 细胞的抑制效应测定124
5.2.2.5 EA 对 816 细胞的抑制效应测定124
5.2.2.6 可见光光照124
5.2.2.7 细胞流式仪分析124
5.2.2.8 统计学分析124
5.3 结果124-134
5.3.1 三种北醌化合物的生物合成、分离及结构鉴定124-126
5.3.2 EA、HA、HB 抗菌生物活性126-128
5.3.3 R366.4 细胞的光敏细胞毒性测定128-129
5.3.4 EA 对肿瘤细胞系的光敏抑制效应测定129-131
5.3.4.1 EA 诱导 Hce-8693 细胞凋亡的光敏抑制效应测定129-130
5.3.4.2 EA 诱导816 细胞凋亡的光敏抑制效应测定130-131
5.3.5 HA 诱导Hce-8693 细胞凋亡的光敏抑制效应测定131-132
5.3.6 HB 诱导Hce-8693 细胞凋亡的光敏抑制效应测定132-133
5.3.7 EA、HA 及HB 对Hce-8693 细胞的抑制效应测定133-134
5.4 讨论134-135
5.5 135-136