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中国被毛孢甾醇提取最优条件正交法

收藏本文 2024-02-19 点赞:13817 浏览:58226 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]是传统名贵中药,具有保护呼吸系统、维护肾功能、抗癌、抗氧化等作用。其无性型为中国被毛孢(Hirsutella sinensis Liu, Guo, YuZeng),具有广阔应用前景。甾醇类物质是冬虫夏草主要活性成分之一,其中麦角甾醇是真菌特征甾醇,具有的抗癌活性,本课题主要对中国被毛孢甾醇提取的最优条件研究。对磷硫铁法和香草醛-冰醋酸比色法测定总甾醇含量了方法学研究,2种方法显色1小时后吸光值变化幅度均小于1%,稳定性较好;精密度RSD分别为1.9%和3.6%;回收率分别为126.3±16.5%和105.4±3.6%,香草醛-冰醋酸法准确度更高;选择香草醛-冰醋酸法为中国被毛孢总甾醇含量的测定方法。单因素实验考查皂化用碱量、乙醇浓度、提取时间、料液比、提取次数5个因素对超声波辅助提取总甾醇的影响,发现皂化用碱量、乙醇浓度、提取次数三因素相邻差异(P0.05),而提取时间、料液比(除1/100外)对提取影响均无统计学性(P0.05);再以KOH/菌丝体比值分别为0、0.5、1,乙醇浓度分别为60%、80%、95%,提取次数分别为1、2、3的3因素3正交法优化超声波辅助提取条件,得最佳提取条件为:KOH/菌丝体比值为1,乙醇浓度为95%,提取3次,并测得总甾醇含量约为5.016%±0.205%。单因素试验温度对热回流提取效果影响很小;以与超声波法相同的3因素3正交设计对热回流法考察,得最佳提取条件为:回流温度50℃,KOH/菌丝体比值为0.5,乙醇浓度为95%,提取2次,每次1小时。验证试验,超声波法优于热回流法。建立了RP-Hplc测定中国被毛孢总麦角甾醇含量的方法,以Hypersil C18反向色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),纯甲醇流动相,上样量201μL,流速1.0mL/min,检测波长282nm,测得总麦角甾醇含量为0.08%。关键词:中国被毛孢论文总甾醇论文麦角甾醇论文正交法论文Hplc论文

    摘要2-3

    Abstract3-10

    章 冬虫夏草的成分和药理作用10-24

    1.1 冬虫夏草介绍12-14

    1.1.1 冬虫夏草的无性型的确定12

    1.1.2 冬虫夏草的甾醇类物质12-14

    1.2 冬虫夏草的药理作用14-21

    1.2.1 肾功能维护作用14-15

    1.2.1.1 对肾毒性损伤的治疗作用14-15

    1.2.1.2 对肾功能衰竭的治疗作用15

    1.2.1.3 对肾炎的治疗作用15

    1.2.2 保护呼吸系统、调节心血管系统的功能15-17

    1.2.3 机体免疫调节功能17-18

    1.2.4 抗肿瘤18-19

    1.2.5 抗氧化、清除体内自由基作用19

    1.2.6 神经系统调节作用19-20

    1.2.7 抗菌抗病毒作用20

    1.2.8 保护肝脏的作用20-21

    1.2.9 其他作用21

    1.3 课题的、目的和内容21-24

    1.3.1 课题的21-22

    1.3.2 课题的目的22

    1.3.3 课题的设计、研究内容22-24

    1.3.3.1 课题设计22-23

    1.3.3.2 研究内容23-24

    章 和方法24-35

    2.1 磷硫铁法测定中国被毛孢总甾醇含量方法学研究24-26

    2.1.1 和仪器24

    2.1.1.1 24

    2.1.1.2 仪器24

    2.1.2 试剂和溶剂配制24-25

    2.1.2.1 试剂24

    2.1.2.2 10%FeCl3·6H2O磷酸溶液24-25

    2.1.2.3 磷硫铁显色液25

    2.1.2.4 麦角甾醇标准品制备25

    2.1.3 样品制备25

    2.1.4 实验方法25-26

    2.1.4.1 显色方法25

    2.1.4.2 测定波长检测方法25

    2.1.4.3 标准曲线绘制方法25-26

    2.2 香草醛-冰醋酸法测定中国被毛孢总甾醇含量方法学研究26-27

    2.2.1 和仪器26

    2.2.1.1 26

    2.2.1.2 仪器26

    2.2.2 试剂和溶剂配制26

    2.2.2.1 化学试剂26

    2.2.2.2 香草醛-冰醋酸显色液26

    2.2.3 样品制备26-27

    2.2.4 实验方法27

    2.2.4.1 显色方法27

    2.2.4.2 测定波长确定方法27

    2.2.4.3 标准曲线绘制方法27

    2.3 超声波辅助提取中国被毛孢总甾醇27-30

    2.3.1 和仪器27-28

    2.3.1.1 27-28

    2.3.1.2 仪器28

    2.3.2 试剂和溶剂配制28

    2.3.3 实验方法28-30

    2.3.3.1 单因素分析皂化用碱量的影响28

    2.3.3.2 单因素实验分析乙醇浓度影响28-29

    2.3.3.3 单因素实验分析提取时间影响29

    2.3.3.4 单因素实验分析料液比影响29

    2.3.3.5 单因素实验分析提取次数影响29-30

    2.3.3.6 正交试验30

    2.4 热回流法提取中国被毛孢总甾醇30-32

    2.4.1 和仪器30-31

    2.4.1.1 31

    2.4.1.2 仪器31

    2.4.2 试剂和溶剂配制31

    2.4.3 实验方法31-32

    2.4.3.1 单因素实验分析热回流温度影响31

    2.4.3.2 正交试验31-32

    2.5 RP-HPLC测定中国被毛孢麦角甾醇含量32-35

    2.5.1 和仪器32-33

    2.5.1.1 32

    2.5.1.2 仪器32-33

    2.5.2 试剂和溶剂配制33

    2.5.2.1 试剂33

    2.5.2.2 麦角甾醇标准品配制33

    2.5.3 样品制备33

    2.5.4 实验方法33-35

    2.5.4.1 色谱条件33-34

    2.5.4.2 流动相的选择34

    2.5.4.3 标准曲线绘制方法34-35

    章:中国被毛孢总甾醇含量测定和提取方法研究35-51

    3.1 磷硫铁法测定中国被毛孢总甾醇含量方法学研究35-38

    3.1.1 吸收波长的确定35

    3.1.2 标准曲线的建立35-36

    3.1.3 稳定性实验结果36-37

    3.1.4 精密度实验结果37

    3.1.5 回收率实验结果37-38

    3.1.6 分析与讨论38

    3.2 香草醛-冰醋酸法测定中国被毛孢总甾醇含量方法学研究38-42

    3.2.1 吸收波长的确定38-39

    3.2.2 标准曲线的建立39

    3.2.3 稳定性试验39-40

    3.2.4 精密度试验40

    3.2.5 回收率试验40-41

    3.2.6 分析与讨论41-42

    3.3 正交优化超声波辅助提取中国被毛孢总甾醇方法42-47

    3.3.1 单因素分析皂化用碱量的影响42

    3.3.2 单因素实验分析料液比影响42-43

    3.3.3 单因素实验分析提取时间影响43

    3.3.4 单因素实验分析乙醇浓度影响43-44

    3.3.5 单因素实验分析提取次数的影响44-45

    3.3.6 正交试验结果45-46

    3.3.7 验证试验46

    3.3.8 分析与讨论46-47

    3.4 正交优化热回流提取中国被毛孢总甾醇方法47-49

    3.4.1 单因素分析热回流温度的影响47-48

    3.4.2 正交试验结果48-49

    3.4.3 验证试验49

    3.4.4 分析与讨论49

    3.5 小结49-51

    章 RP-Hplc测定中国被毛孢麦角甾醇含量51-57

    4.1 Hypersil BDS C18(210mm×4.6mm,5 m)色谱柱结果51-53

    4.1.1 100%甲醇流动相等度洗脱结果51

    4.1.2 90%甲醇流动相等度洗脱结果51-52

    4.1.3 乙腈/甲醇(75/25,V/V)流动相等度洗脱结果52

    4.1.4 A甲醇/水(80/20,V/V),B甲醇/二氯甲烷(75/25,V/V)梯度洗脱结果52-53

    4.2 Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5m)53-56

    4.2.1 纯甲醇流动相色谱图53-54

    4.2.2 标准曲线绘制54-55

    4.2.3 中国被毛孢麦角甾醇含量测定55-56

    4.2.4 讨论56

    4.3 小结56-57

    总结57-58

    致谢58-59

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