中文摘要4-6
Abstract6-11
第一章 绪论11-19
1.1 苯乳酸的介绍11-14
1.1.1 苯乳酸的结构与性质11
1.1.2 苯乳酸的抑菌谱11-12
1.1.3 苯乳酸的安全性12
1.1.4 苯乳酸的化学合成12
1.1.5 苯乳酸的生物合成12-13
1.1.6 苯乳酸的运用13-14
1.2 乳酸脱氢酶的来源和探讨近况14-16
1.2.1 乳酸脱氢酶介绍14-15
1.2.2 乳酸脱氢酶的来源15-16
1.2.3 乳酸菌中对苯丙酮酸有活性的乳酸脱氢酶探讨16
1.2.4 乳酸脱氢酶基因的探讨进展16
1.3 乳酸脱氢酶的基因工程16-17
1.4 生物信息学17-18
1.5 本课题的探讨作用及内容18-19
1.5.1 探讨作用18
1.5.2 探讨内容18-19
第二章 副干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的生物信息学浅析19-26
2.1 前言19
2.2 材料与策略19-20
2.2.1 材料19
2.2.2 策略19-20
2.3 结果20-24
2.3.1 Blast 的浅析结果20
2.3.2 LDH 蛋白的理化性质20-21
2.3.3 ldh 翻译后的修饰位点、亚细胞定位的预测21
2.3.4 LDH 的拓扑结构和二级结构浅析21
2.3.5 L.paracasei 的 LDH 的模拟三维结构21-22
2.3.6 副干酪乳杆菌 LDH 与其他物种 LDH 的比较和分子进化的构建22-24
2.4 小结24-26
第三章 副干酪乳杆菌 ldh 基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达26-40
3.1 前言26
3.2 材料26-30
3.2.1 菌种与质粒26
3.2.2 培养基26-27
3.2.3 工具酶27
3.2.4 试剂27
3.2.5 主要试剂配制27-29
3.2.6 主要仪器与设备29-30
3.3 策略30-35
3.3.1 乳酸脱氢酶基因引物的设计30
3.3.2 L.paracasei 基因组 DNA 的提取30-31
3.3.3 PCR 扩增 ldh 基因31-34
3.3.4 原核表达载体的构建34-35
3.4 结果35-38
3.4.1 副干酪乳杆菌 ldh 基因的 PCR 扩增35-36
3.4.2 克隆载体 pMD19-ldh 的构建36-37
3.4.3 表达载体的构建37
3.4.4 重组乳酸脱氢酶的表达37-38
3.4.5 酶活力测定38
3.5 小结38-40
第四章 重组乳酸脱氢酶的酶学性质探讨40-49
4.1 前言40
4.2 仪器与试剂40-41
4.2.1 仪器40-41
4.2.2 试剂41
4.2.3 主要试剂配制41
4.3 策略41-42
4.3.1 LDH 粗酶液的提取41
4.3.2 温度对 LDH 酶活性的影响41-42
4.3.3 温度对 LDH 稳定性的影响42
4.3.4 不同 pH 对 LDH 酶活性的影响42
4.3.5 不同金属离子对 LDH 酶活性的影响42
4.3.6 重组 LDH 酶的米氏常数 Km 的测定42
4.4 结果42-47
4.4.1 温度对 LDH 酶活性的影响42-43
4.4.2 温度对 LDH 稳定性的影响43-44
4.4.3 不同 pH 对 LDH 酶活性的影响44
4.4.4 不同金属离子对 LDH 酶活性的影响44-45
4.4.5 重组 LDH 对 NADH 和苯丙酮酸的米氏常数 Km45-47
4.5小结47-49
总结与展望49-51