本站原创摘要5-6
Abstract6-10
引言10-12
1 文献综述12-24
1.1 核小体及核小体定位12-15
1.1.1 核小体结构12-13
1.1.2 核小体定位与基因表达调控13-14
1.1.3 影响核小体定位的因素14-15
1.2 酵母15-19
1.2.1 酵母细胞壁组成及破壁提取基因组策略15-16
1.2.2 酵母基因组组成16-17
1.2.3 酵母 ARS17
1.2.4 酵母基因组标记检测17-18
1.2.5 核小体定位对酵母 ARS 活性的影响18-19
1.3 核小体体外组装及检测技术19-24
1.3.1 组蛋白19-20
1.3.2 核小体体外组装20-21
1.3.3 核小体体外组装后的检测21-24
2 实验材料与策略24-34
2.1 酵母菌的培养及生长曲线测定24
2.1.1 材料与策略24
2.1.2 酵母生长曲线测量24
2.2 酵母菌基因组的提取与检测24-26
2.2.1 溶菌酶法24
2.2.2 蜗牛酶过夜处理法24-25
2.2.3 蜗牛酶反复冻融法25
2.2.4 珠磨法25
2.2.5 提取基因组的检测25-26
2.3 酵母转化26-27
2.3.1 材料与策略26
2.3.2 质粒 p405 的提取26
2.3.3 酵母感受态细胞制备26
2.3.4 质粒转入酵母细胞26-27
2.4 BrdU 标记酵母基因组27-28
2.4.1 载玻片的预处理27
2.4.2 提取标记基因组涂片检测27
2.4.3 琼脂糖固定标记的酵母细胞涂片检测27-28
2.5 酵母组蛋白提取28-30
2.5.1 蛋白标准曲线绘制28
2.5.2 酵母组蛋白提取28-29
2.5.3 SDS-PAGE 检测29-30
2.5.4 蛋白含量测定30
2.6 核小体体外组装30-34
2.6.1 体外组装系统建立30-31
2.6.2 酵母 ARS304、305 体外形成核小体31-34
3 结果与浅析34-45
3.1 酵母菌生长曲线测定34
3.2 酵母基因组的提取与检测34-37
3.2.1 破壁效果比较34-35
3.2.2 提取的基因组 DNA 的浓度和纯度35-36
3.2.3 琼脂糖凝胶电泳检测36-37
3.3 BrdU 标记基因组检测酵母 ARS 复制活性37-38
3.3.1 提取标记基因组涂片检测37-38
3.3.2 琼脂糖固定标记的酵母细胞涂片检测38
3.4 酵母组蛋白提取及检测38-41
3.4.1 蛋白标准曲线38-39
3.4.2 组蛋白浓度39
3.4.3 SDS-PAGE 检测39-41
3.5 核小体体外组装41-45
3.5.1 采取 601 序列建立体外组装系统41-42
3.5.2 ARS304、305 体外组装形成核小体的能力比较42-45
4 讨论45-47
结论47-48