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摘要：疾病制约与预防中心报道，在美国，肾脏疾病已成为第九大主要死因。尽管传统的肾替代治疗，如血液透析、血液滤过及腹膜透析都能成功用于长期治疗慢性肾衰竭，但仍然有高的死亡率。现有的生物人工肾小管辅助装置（bioartificial renal assistdevice, RAD）克服了传统透析技术只替代了肾小球的功能，而忽略了肾小管功能的缺陷。体外实验证明该装置能很好地发挥肾小管的功能，被美国食品药品管理局批准进入Ⅰ/Ⅱ期临床实验。但因所采取的透析膜材料为高分子聚合物薄膜，该材料固有的疏水性表面限制了其运用，另外，其孔密度较低，不便于装置的微小化及体内移植。TiO_2纳米管阵列由于其优异的生物相容性、亲水性及特殊的管状结构，近年来在生物医学领域引起了广泛关注。本论文探讨采取排列规整、两端通透及较高孔密度的TiO_2纳米管阵列薄膜作为透析膜材料，以克服高分子聚合物薄膜的缺陷。能否将肾脏细胞较好的黏附于TiO_2纳米管材料并使其发挥肾脏的生理功能，目前还没有公开的文献报道。本论文采取阳极氧化法制备了两端通透的TiO_2纳米管阵列，通过制约阳极氧化电压获得了4种不同管径的纳米管材料，将每种材料分别经未退火未光照、未退火光照、退火未光照及退火光照处理，并在其上分别种植肾小管上皮细胞株（LLC-PK1）和血管内皮细胞株（ECV304）。在此基础上详细探讨了TiO_2纳米管材料的几何形貌参数、晶型结构及光催化活性等对两种细胞的黏附及增殖影响规律。利用荧光显微镜考察了TiO_2纳米管阵列有序生物透析膜组织工程构建中细胞-材料之间的相互影响规律，采取MTT策略检测了黏附细胞的活性及增殖；同时利用扫描电镜观察了LLC-PK1细胞及ECV304细胞的生长形态。在获取了各单种细胞最佳的生长条件参数之后，考察了混合细胞之间的相互作用机理，探讨了胶原蛋白和动态剪切力对单种细胞及混合细胞的黏附、增殖的影响规律，并对制备的透析膜材料进行了初步的重吸收功能检测。探讨结果表明管径为70nm且退火未光照的TiO_2纳米管阵列膜最有利于LLC-PK1细胞及ECV304细胞的黏附及增殖；扫描电镜观察显示LLC-PK1细胞在TiO_2纳米管上的生长形态多呈鹅卵石样，并延伸出很长的伪足，且细胞表面附着密集的微绒毛；ECV304细胞在纳米管上呈圆形。细胞混合种植能较好地推动各单种细胞的黏附生长，混合细胞的活性要高于两单种细胞；在材料表面包被胶原蛋白能显著改善内皮细胞的黏附、增殖，但对上皮细胞的影响不大；动态剪切应力可显著提升增殖活性，且使细胞分布更均匀，有利于细胞形成单层状；功能检测实验证实两种细胞能在TiO_2纳米管阵列上存活，且能发挥肾脏的重吸收功能。这为利用组织工程构建具有复合功能的生物人工肾提供了良好的实验基础。关键词：生物人工肾论文TiO_2纳米管阵列论文肾小管上皮细胞论文血管内皮细胞论文胶原蛋白论文动态剪切力论文
摘要4-6
Abstract6-10
1 绪论10-24
1.1 肾脏疾病的近况10-11
1.2 人工肾装置的进展11-15
1.3 组织工程概述15-16
1.4 透析膜材料的选择16-17
1.5 细胞外基质的作用17-18
1.6 本课题的探讨作用、内容及可行性浅析18-24
2 两端通透的 TiO_2纳米管阵列的制备及表征24-32
2.1 引言24
2.2 两端通透 TiO_2纳米管阵列的形成机理及运用24-26
2.3 实验策略26-28
2.4 形貌物相表征28-31
2.5 本章小结31-32
3 肾小管上皮细胞的组织工程构建32-40
3.1 引言32
3.2 细胞的购写及培养32-33
3.3 LLC-PK1细胞的组织工程构建33-39
3.4 本章小结39-40
4 内皮细胞的组织工程构建40-47
4.1 引言40
4.2 细胞的购写及培养40
4.3 ECV304 细胞的组织工程构建40-45
4.4 本章小结45-47
5 混合细胞的组织工程构建47-52
5.1 引言47
5.2 混合细胞种植的实验策略47-48
5.3 混合细胞种植的生长状态48-49
5.4 混合细胞的黏附及增殖活性49-51
5.5 本章小结51-52
6 胶原蛋白及动态剪切力对细胞组织工程的影响及功能评估52-65
6.1 引言52
6.2 胶原蛋白对细胞组织工程的影响52-56
6.3 动态剪切力对细胞组织工程的影响56-62
6.4 重吸收功能评估62-64
6.5 本章小结64-65
7 全文总结及展望65-68
7.1 论新点65
7.2 全文总结和展望65-68
致谢68-69