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摘要：脂肪酸结合蛋白(FABP)可将脂肪酸以质膜转运到β-氧化位点和三酰基甘油或磷脂合成部位，在动物脂肪代谢中起着非常重要的作用。本探讨利用ARTerTM RACE技术，克隆了兰州大尾羊H-FABP基因cDNA全长序列,并对其生物信息进行了浅析。探讨结果如下：1.以兰州大尾羊尾部脂肪组织中提取总RNA,通过RNAiso Plus试剂盒将总RNA反转录成cDNA。利用ARTerTM RACE技术,运用引物GSP2和NGSP2扩增出231bp的5’端片段，GSP1和NGSP1扩增出425bp的3’端片段。运用引物GSP1和GSP2扩增出177bp的中间片段,最后经序列拼接得到H-FABP基因的cDNA全长序列,长度为748bp(GenBank登录号：JQ780322)。2. H-FABP基因ORF长402bp (110nt-511nt),编码133个氨基酸：起始子ATG位于110nt-112nt,5'-非翻译区长109bp (1nt-109nt);终止子为TGA位于509nt-511nt,3'-非翻译区长237bp (512nt-748nt)。3. H-FABP基因编码蛋白的分子量为14761.8Da,分子式为C655H1055N173O205S4,论述等电点为6.11,属于亲水性的稳定蛋白,其结构和其他物种FABP蛋白相似,由2个α螺旋和10个反向平行β折叠构成。4.将兰州大尾羊与其他物种H-FABP同源性浅析和氨基酸序列比对,发现兰州大尾羊与徐淮种山羊、台湾山羊、天府种山羊、加拿大普通牛(gi：74354539)、中国肉牛(gi：224760716)、家犬、欧洲种家兔、褐家鼠和小家鼠H-FABP基因的核苷酸同源性分别为99.3%、99.0%、99.0%、97.4%、96.8%、87.4%、84.5%、82.5%和80.8%；其对应的H-FABP蛋白氨基酸同源性分别为100%、100%、100%、97.0%、96.2%、94.0%、88.0%、87.2%和86.5%：上面陈述的六种反刍动物H-FABP氨基酸序列中,第34位、109位、122位和132位处,两种牛分别为G(甘氨酸)、M(甲硫氨酸)、T(苏氨酸)和Q(谷氨酰胺),而羊分别为A(丙氨酸)、Ⅰ(异亮氨酸)、S(丝氨酸)及E(谷氨酸)所代替；在第50位,羊和加拿大普通牛(gi：74354539)为V(缬氨酸),而中国肉牛(gi：224760716)为Ⅰ(异亮氨酸)。5.兰州大尾羊H-FABP基因含有24个限制性酶切位点；其蛋白属于非跨膜蛋白,且有着于细胞质的可能性为21%；其氨基酸序列中不含有二硫键：氨基酸序列中,有2个Ser(丝氨酸)、5个Thr(苏氨酸)和1个Tyr(酪氨酸)共8个氨基酸可能成为蛋白激酶磷酸化位点。关键词：兰州大尾羊论文脂肪酸代谢论文RACE论文FABP论文cDNA论文
摘要2-3
Abstract3-5
目录5-6
第一章 文献综述6-18
1 兰州大尾羊6-7
2 脂肪酸代谢7
3 反刍动物脂肪酸代谢相关基因及探讨进展7-14
4 cDNA全长序列克隆策略14-17
5 探讨目的和作用17-18
第二章 FABP基因克隆探讨18-34
1 RACE技术克隆FABP基因5’端和3’端18-29
2 RT-PCR技术克隆FABP基因中间段29-32
3 兰州大尾羊FABP基因cDNA全长序列拼接结果32-34
第三章 FABP基因及蛋白生物信息学浅析34-46
1 兰州大尾羊H-FABP基因浅析34-35
2 兰州大尾羊H-FABP一级结构浅析35-37
3 兰州大尾羊H-FABP二级结构浅析37-38
4 兰州大尾羊H-FABP结构浅析38
5 FABP基因系统进化树的构建及同源性浅析38-45
6 兰州大尾羊H-FABP蛋白功能预测45-46
第四章 浅析与讨论46-51
第五章 全文结论51-52