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摘要：目的：糖尿病肾病(DN)是糖尿病最常见最严重的微血管并发症之一，目前临床上还没有特别有效的措施能够阻止DN的发生和进展。本探讨通过探讨Rho/Rho激酶(ROCK)信号通路与转化生长因子β1(TGF-β1)信号通路在2型糖尿病大鼠肾病发病机制中的作用以及ROCK特异性抑制剂法舒地尔(fasudil)对DN的干预效应，有可能为DN提供新的防治对策。策略：通过高脂饮食结合一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ，30mg/kg，i.p.)建立2型糖尿病大鼠模型，并设立正常对照组。10w末，行高胰岛素正常葡萄糖钳夹试验，测定葡萄糖输注率(GIR)，证实糖尿病动物模型胰岛素抵抗的有着；经腹主静脉取血检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)。随后将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组和法舒地尔干预组(10mg/kg/day，i.p.)。每周测各组大鼠体重及鼠尾收缩压(SABP)。24w末留24h尿，测尿白蛋白排泄率(UAER)；腹主静脉取血测FBG、FINS、TG、TC、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和糖化血红蛋白(HbA1c)。称取左侧肾脏重量，计算肾脏质量(KW)与体质量(BW)的比值(KW/BW)。分别留取肾组织供HE染色观察肾脏组织形态；Masson染色和羟脯氨酸(HYP)含量测定评估肾组织胶原沉积情况；逆转录多聚酶链反应法(RT-PCR)测定肾皮质TGF-β1mRNA、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平；Western blot法测定肾皮质磷酸化的肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(p-MYPT1)水平，代表ROCK的活性。结果：1一般情况对照组大鼠进食、饮水、活动如常，毛色正常。而糖尿病大鼠则出现显著的多食、多饮、多尿，活动显著减少，毛色晦暗。2胰岛素抵抗指标10w末，与对照组相比，糖尿病大鼠GIR显著降低(5.45±0.84mg/kg/min vs11.34±0.76mg/kg/min，P0.01)。24w末计算三组大鼠的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR=FBG×FINS÷22.5)。与对照组相比，糖尿病组和法舒地尔干预组大鼠的HOMA-IR显著增高(110.86±5.27与109.17±4.88分别vs12.23±1.99，P0.01)。而糖尿病组和法舒地尔干预组大鼠HOMA-IR的差别无统计学作用(110.86±5.27vs109.17±4.88，P0.05)。3BW、KW和KW/BW10w末，糖尿病大鼠BW显著高于对照组(P0.05)。24w末，糖尿病组和法舒地尔干预组大鼠的BW显著低于对照组(P0.05)。糖尿病组和法舒地尔干预组大鼠的BW差别无统计学作用(P0.05)。与对照组相比，糖尿病组大鼠的KW和KW/BW显著增高(P0.01)。法舒地尔干预组大鼠的KW和KW/BW较糖尿病组显著降低(P0.01)，与对照组比较差别无统计学作用(P0.05)。4血生化指标10w末，糖尿病大鼠的FBG、FINS、TG与对照组相比显著增高(P0.01)，TC与对照组相比显著增高(P0.05)。24w末，糖尿病组和法舒地尔干预组大鼠与对照组相比，FBG、FINS、TG、TC、HbA1c均显著增高(P0.01)。而这些指标在糖尿病组和法舒地尔干预组之间比较，差别无统计学作用(P0.05)。5肾脏相关指标与SABP24w末，与对照组相比，糖尿病组大鼠的UAER显著增加(0.35±0.04μg/min vs0.05±0.01μg/min，P0.01)。而法舒地尔干预组大鼠的UAER较糖尿病组显著减少(0.08±0.04μg/min vs0.35±0.04μg/min，P0.01)。法舒地尔干预组大鼠的UAER仍高于对照组(0.08±0.04μg/min vs0.05±0.01μg/min，P0.05)。三组大鼠的血Cr差别无统计学作用(P0.05)。糖尿病组和法舒地尔干预组大鼠的BUN较对照组显著增高(13.56±2.19mmol/L与13.36±1.81mmol/L分别vs8.01±1.11mmol/L，P0.01)，而糖尿病组和法舒地尔干预组比较差别无统计学作用(13.56±2.19mmol/L vs13.36±1.81mmol/L，P0.05)。三组大鼠的SABP差别无统计学作用(P0.05)。6HE染色结果对照组大鼠肾小球结构正常；肾小管上皮细胞排列整齐，胞浆丰富。与对照组相比，糖尿病组大鼠肾小球肥大，系膜区显著扩张，系膜基质增加；肾小管上皮细胞结构紊乱，胞浆丢失，泡沫样变。法舒地尔干预组上面陈述的转变均较糖尿病组显著减轻。7HYP含量测定与对照组相比，糖尿病组大鼠肾组织HYP含量显著增加(0.50±0.05μg/mg vs0.36±0.07μg/mg，P0.01)。法舒地尔干预组与糖尿病组相比，HYP含量显著减少(0.37±0.04μg/mg vs0.50±0.05μg/mg，P0.01)，与对照组比较差别无统计学作用(0.37±0.04μg/mg vs0.36±0.07μg/mg，P0.05)。8Masson染色结果对照组大鼠肾间质及血管周围可以见到少量胶原纤维的分布，胶原面密度为0.076±0.005。与对照组相比，糖尿病组大鼠肾间质及血管周围的胶原纤维显著增加(胶原面密度：0.148±0.007vs0.076±0.005，P0.01)。法舒地尔干预组大鼠肾间质及血管周围的胶原纤维较糖尿病组大鼠显著减少(胶原面密度：0.079±0.007vs0.148±0.007，P0.01)，与对照组比较差别无统计学作用(胶原面密度：0.079±0.007vs0.076±0.005，P0.05)。9免疫组化染色结果与对照组相比，糖尿病组大鼠肾组织中TGF-β1蛋白表达显著增加(阳性面积：21.4±3.1%vs4.3±1.5%，P0.01)。法舒地尔干预组大鼠肾组织中TGF-β1蛋白表达较糖尿病组大鼠显著减少(阳性面积：5.1±2.3%vs21.4±3.1%，P0.01)，与对照组相比，差别无统计学作用(阳性面积：5.1±2.3%vs4.3±1.5%，P0.05)。10基因表达结果与对照组相比，糖尿病组大鼠肾皮质TGF-β1mRNA、CTGF mRNA表达均显著增加(P0.01)。法舒地尔干预组TGF-β1mRNA、CTGFmRNA表达较糖尿病组大鼠显著降低(P0.01)，与对照组相比，差别无统计学作用(P0.05)。11蛋白表达结果与对照组相比，糖尿病组大鼠肾皮质p-MYPT1水平显著增加(P0.01)。法舒地尔干预组大鼠肾皮质p-MYPT1较糖尿病组显著减少(P0.01)，与对照组相比，差别无统计学作用(P0.05)。结论：高血糖能够激活肾脏Rho/ROCK信号通路，该通路参与了对TGF-β1和CTGF表达的调控，在糖尿病肾脏系膜细胞外基质增加的形成中发挥着重要作用。Fasudil能够有效地抑制糖尿病肾纤维化，减少尿蛋白，这可能与它抑制了肾脏上TGF-β1/CTGF信号通路有关，发挥着不依赖于血压、血糖制约的肾脏保护作用。本探讨结果提示抑制ROCK有可能成为DN新的治疗靶点。关键词：糖尿病肾病论文Rho激酶论文信号通路论文转化生长因子β1论文结缔组织生长因子论文法舒地尔论文
摘要4-8
ABSTRACT8-13
前言13
材料与策略13-21
结果21-24
附图24-30
附表30-32
讨论32-35
结论35