本站原创摘要4-5
ABSTRACT5-10
缩略语表10-11
1 前言11-33
1.1 天然人血清白蛋白(HSA)性质与药理作用11-14
1.1.1 HSA 的合成11
1.1.2 HSA 的结构11-12
1.1.3 HSA 的理化性质12
1.1.4 HSA 的药理作用12-14
1.1.5 HSA 的运用和作用14
1.2 重组人血清白蛋白(rHSA)的表达与药理作用14-29
1.2.1 rHSA 的原核表达14-15
1.2.2 rHSA 的酵母表达15-28
1.2.3 rHSA 的其他系统表达28
1.2.4 rHSA 的药理作用28
1.2.5 rHSA 的运用前景和作用28-29
1.3 rHSA 的临床运用29-30
1.3.1 人造血液替代品29
1.3.2 推动药物的靶向作用29
1.3.3 作为辅助药剂29-30
1.3.4 与其他蛋白融合30
1.4 rHSA 的产业化探讨进展30-31
1.5 本论文的作用和革新性31-33
2 材料与策略33-51
2.1 材料33-37
2.1.1 主要实验材料33
2.1.2 主要试剂盒及试剂33
2.1.3 贮存液和培养基33-37
2.1.4 主要仪器设备37
2.2 实验策略37-48
2.2.1 HSA 基因序列的设计37-39
2.2.2 重组表达质粒 pPIC9K-HSA 的构建及鉴定39-41
2.2.3 重组表达质粒 pPICZa-A-HSA 的构建及鉴定41-42
2.2.4 毕赤酵母 X-33、GS115 及 D1168 的转化42-43
2.2.5 基因组 PCR 法鉴定阳性重组子43-44
2.2.6 不同 rHSA 工程菌表达情况检验及产物鉴定44-45
2.2.7 rHSA 酵母菌在摇瓶中的最佳表达条件试验45-46
2.2.8 rHSA 酵母菌的中试规模诱导表达46-48
2.3 浅析策略48-51
2.3.1 菌体密度的测定48
2.3.2 菌体湿重、干重的测定48
2.3.3 甲醇浓度的测定48
2.3.4 SDS-PAGE 凝胶电泳48-49
2.3.5 蛋白浓度的测定49-50
2.3.6 蛋白鉴定50-51
3 结果51-65
3.1 重组表达质粒 pPIC9K-HSA 鉴定结果51
3.2 重组表达质粒 pPICZa-A-HSA 鉴定结果51-52
3.3 重组质粒转入毕赤酵母验证结果52-54
3.4 不同 rHSA 工程菌的表达结果及重组蛋白的鉴定结果54-58
3.4.1 不同 rHSA 工程菌的表达结果54-55
3.4.2 表达产物鉴定结果55-58
3.5 rHSA 酵母菌在摇瓶中条件优化结果58-61
3.5.1 体积、转速优化结果58
3.5.2 pH 优化结果58-59
3.5.3 温度优化结果59
3.5.4 甲醇浓度及添加次数优化结果59-60
3.5.5 不同盐离子浓度优化结果60-61
3.6 rHSA 酵母菌中试规模的条件优化结果61-65
3.6.1 培养基选择结果61-63
3.6.2 起始诱导菌体密度优化结果63
3.6.3 溶氧优化结果63
3.6.4 pH 优化结果63
3.6.5 温度优化结果63-64
3.6.6 甲醇浓度优化结果64
3.6.7 添加剂优化结果64-65
4 讨论65-71
结论71-73