本站原创
摘要：目的：运用大鼠海绵体分离、培养肌源性干细胞（muscle derived stem cellsMDSCs），检测干细胞标志物的表达；将大鼠海绵体肌源性干细胞进行传代培养，观察其自我更新及持续增殖能力；检测分离细胞在特定条件下向平滑肌细胞分化的潜能。策略：取2月龄SD雄性大鼠为实验对象，用percoll密度梯度离心法结合改良的preplate差速贴壁分离、纯化大鼠海绵体肌源性干细胞，利用免疫荧光细胞化学法、流式细胞技术检测PP6细胞肌源性干细胞标记物Sca-1、Dein的表达情况，分离细胞进行传代培养利用细胞计数法测定第3、6、8代细胞的生长曲线，免疫荧光法实时检测传代细胞Sca-1、Dein的表达，采取与分离所得的大鼠海绵体平滑肌细胞共培养的策略诱导分离而得的细胞分化为平滑肌细胞，并运用免疫荧光细胞化学的策略检测特异性平滑肌肌动蛋白（a-a）的表达。结果：用percoll密度梯度离心法结合改良的preplate差速贴壁分离培养所获PP6细胞中大部分体积较小，贴壁很慢，遮光性好，多成球形、纺锤形、梭形，培养72h后，显微镜下可见细胞数量显著增加并均匀散在分布，以纺锤形及梭状为主，少数形态不规则，5-7d可见悬浮细胞基本消失，贴壁细胞分裂增殖显著，细胞密度显著增加，细胞体积增大，细胞形态出现较大变化，可见长梭形、长棱形的细胞贴壁生长，培养12～14d,贴壁细胞继续繁殖，细胞密度增大，并逐渐融合，培养至14-16d，原代细胞可达到80-90％汇合。传代培养中细胞呈贴壁均匀生长状态，细胞增殖迅速。倒置显微镜观察细胞形态无显著变化，取第3、6、8代细胞绘制生长曲线，结果显示：细胞群体倍增周期约48小时，体外培养7天左右可进入生长的平台期；传代培养至第8代，细胞的增殖能力无显著转变；将生长状态良好的第三代分离所得细胞与大鼠海绵体肌源性干细胞共培养2天后，免疫荧光细胞化学法可检测到核标记的肌源性干细胞有平滑肌肌动蛋白（a-a）的表达。结论：大鼠海绵体中分离获得的具有肌源性干细胞表型的细胞具有较稳定的自我更新及增殖能力，并且在特定条件下可分化为平滑肌细胞，进一步提示了海绵体中有着肌源性干细胞。关键词：肌源性干细胞论文Sca-1论文Dein论文共培养论文分化论文
中文摘要4-6
Abstract6-8
目录8-9
引言9-13