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阿霉素阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin与podocalyxin蛋白表达与泼尼松干预实验

收藏本文 2024-03-02 点赞:24295 浏览:101183 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:目的:观察泼尼松对阿霉素肾病(ADN)大鼠血、尿生化指标、肾脏病理转变及肾小球足细胞nephrin和podocalyxin蛋白表达的影响,探讨足细胞损伤在ADN发生进展中的作用及泼尼松对足细胞损伤的保护作用。策略:24只健康雄性Wistar大鼠,适应性喂养3d后,随机分为对照组(n=8)、ADN组(n=8)及泼尼松干预组(n=8)。采取小剂量间隔1周两次尾静脉注射阿霉素法(剂量分别为4mg/kg及3.5mg/kg)建立大鼠ADN模型。于实验第4周起,每日予泼尼松干预组泼尼松12.5mg/kg,配成水溶液灌胃,其余两组同期予等剂量自来水灌胃,至实验结束(第8周末)。测定各组大鼠第0周、4周、8周24小时尿蛋白(24hUP)排泄量、尿肌酐(Ucr)及血生化指标,包括血清总蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、胆固醇(Cho)、血肌酐(Scr)、尿素氮(Bun),计算内生肌酐清除率(Ccr);观察各组大鼠第8周末光镜下肾组织病理学转变,计算肾小球细胞外基质面积与肾小球面积之比(ECM/GA),评估肾脏病理积分:采取免疫组化法检测肾小球nephrin及podocalyxin蛋白的分布及表达,并运用图像浅析软件测定其表达的平均光密度值。运用SPSS18.0统计软件进行统计学浅析。结果:1.对照组、ADN组及泼尼松干预组大鼠各项生化指标变化实验4周时,ADN组、泼尼松干预组24hUP、Cho、Scr升高,Tp、Alb、 Ccr降低,与对照组比较,差别均有统计学作用,提示ADN造模成功;实验8周时,ADN组24hUP、Cho、Scr持续升高,Tp、Alb、Ccr继续降低,泼尼松干预组与ADN组比较24hUP、Cho、Scr降低,Tp、Alb、Ccr升高,差别均有统计学作用:泼尼松干预组第8周与其第4周比较,24hUP、Cho、Scr降低,Tp、Alb升高,差别均有统计学作用,Ccr虽然有所升高,但差别无统计学作用。2.各组大鼠肾脏病理学转变(1)光镜下转变:对照组肾小球、肾小管结构大致正常,毛细血管开放良好:ADN组可见部分肾小球囊壁增厚,并与毛细血管襻发生粘连,系膜细胞及基质中、重度增生,肾间质内可见炎细胞浸润,肾小管扩张,管腔内可见蛋白管型;泼尼松干预组较ADN组有不同程度减轻,体现为肾小球囊壁轻度增厚,未见显著粘连,系膜细胞仅见轻度增生,管腔内未见蛋白管型,肾间质内未见炎细胞浸润。(2)肾小球ECM/GA比值及肾脏病理积分:泼尼松干预组ECM/GA比值、肾小球病理积分、肾小管病理积分、肾脏总病理积分均低于ADN组(均P0.01)。3.各组肾组织nephrin及podocalyxin蛋白的分布及表达Nephrin、podocalyxin在对照组肾小球均有大量棕表达,沿肾小球毛细血管襻呈连续、粗线样分布;在ADN组肾小球仅有少量表达,棕粗线样沉积逐渐变细、变淡或消失,与对照组比较,差别有统计学作用(均P0.01);泼尼松干预组与ADN组比较阳性表达增加,恢复了粗线样沉积,差别有统计学作用(均P0.01);泼尼松干预组与对照组比较阳性表达虽有减少,但差别无统计学作用(均P0.05)。4.相关性浅析ADN组肾小球nephrin蛋白表达与第8周末24hUP、Cho、ECM/GA、肾小球病理积分呈负相关(r=-0.864、-0.861、-0.909、-0.922,均P0.01),与Alb、肾小球podocalyxin蛋白表达呈正相关(r=0.964、0.948,均P0.01),与其余指标无显著相关性:ADN组肾小球podocalyxin蛋白表达与第8周末24hUP、Cho、 ECM/GA、(?)肾小球病理积分呈负相关(r=-0.801、-0.792、-0.813、-0.821,均P0.01),与Alb呈正相关(r=0.918,P0.01),与其余指标无显著相关性。结论:1.小剂量间隔1周两次尾静脉注射阿霉素诱导法可成功复制大鼠ADN模型。2.足细胞损伤与ADN蛋白尿的发生进展及肾脏病理损害的进展密切相关,肾小球nephrin、podocalyxin蛋白可作为了解ADN足细胞损伤程度的较敏感指标,肾小球nephrin、podocalyxin蛋白表达减少可能在ADN病变演变历程中发挥了重要作用。3.泼尼松能减轻ADN大鼠的蛋白尿及肾脏病理损害,对足细胞损伤呈现保护作用,其机制可能为通过上调nephrin、podocalyxin蛋白的表达。关键词:阿霉素肾病论文足细胞论文nephrin论文podocalyxin论文泼尼松论文

    中文摘要4-6

    Abstract6-10

    符号说明10-11

    前言11-15

    探讨近况、成果11-13

    探讨目的、策略13-15

    1 材料与策略15-21

    1.1 材料15-16

    1.1.1 实验动物15

    1.1.2 主要试剂15

    1.1.3 主要仪器15-16

    1.2 实验策略16-21

    1.2.1 实验动物模型的建立16

    1.2.2 实验动物分组16

    1.2.3 实验室生化指标的检测16-17

    1.2.4 肾组织病理学检查17-19

    1.2.5 肾小球nephrin、podocalyxin蛋白的免疫组织化学测定19-20

    1.2.6 统计学处理20-21

    2 实验结果21-35

    2.1 实验动物存活状态21

    2.2 各组大鼠血、尿生化指标的动态变化21-28

    2.3 各组大鼠肾脏组织病理学检查28-30

    2.3.1 各组大鼠肾组织病理学光镜下转变28-30

    2.3.2 各组大鼠8周时肾小球ECM/GA比值比较30

    2.3.3 各组大鼠肾脏病理积分30

    2.4 各组大鼠肾小球nephrin、podocalyxin蛋白的免疫组化结果30-34

    2.5 相关性浅析34-35

    3 讨论35-42

    3.1 大鼠阿霉素肾病模型与发病机制35

    3.2 足细胞与NS35-40

    3.2.1 足细胞的结构、分子组成及生物学特性35-36

    3.2.2 足细胞损伤的机制及体现36-37

    3.2.3 足细胞相关蛋白在NS发病机制中的作用37-40

    3.3 糖皮质激素在NS治疗中的作用机制探讨40-42

    结论42-43

    不足与展望43-44

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