本站原创关键词 环境内分泌干扰物 性早熟 雌激素样活性 中国传统医药
1006-1533（2013）04-0033-04
我院近二十年来，对儿童性早熟的发病规律、诊断及治疗进行了系统深入的研究，并制定了一套以中药为主的治疗方案，在临床上取得了显著疗效。本文在既往采用中药成功治疗性早熟的理论及实践经验的基础上，制定了针对环境内分泌干扰物（environmental endocrine disrupters， EEDs）拟雌激素作用的中药治疗方案，治疗受EEDs污染的性早熟患儿及染毒动物，并以及骨骼发育水平作为指标，验证该治疗方案对EEDs拟雌激素活性的拮抗作用。
1 材料与方法
1.1 临床实验
1.1 研究对象
临床上筛查出EEDs暴露水平较高的性早熟女孩73例，起病年龄6.2～8.3岁，初诊年龄6.5～11.3岁。
1.2 药物及治疗方法
中药方剂由生地、炙龟板、黄柏、知母等组成。由本院中药制剂室煎制成浓缩合剂，每ml约含生药2.5 g。每日3次，每次30 ml，疗程为3个月摘自：毕业论文前言www.udooo.com
。1.3 评估方法
子宫、卵巢体积测定 以Hitachi EUB 40型二维超声诊断仪测量子宫体和卵巢的长、宽、厚径，按（π/6×长×宽×厚） ml公式分别计算子宫体积和两侧卵巢的体积。骨矿含量及骨密度测定 采用pDEXA型双能X线吸收骨矿分析仪测定左侧桡、尺骨的骨矿含量及骨密度。
血清雌二醇（estradiol，E2）及血清骨钙素（OST）检测 采用放射免疫分析法测定血清E2及OST含量，试剂盒分别由美国DPC公司及中国原子能科学研究院提供。
1.4 统计学方法
采用SPSS 11.5统计软件，治疗前后的对比采用自身配对t检验。
1.2 动物实验部分
1.2.1 实验动物及饲养条件
3周龄Sprague Dawley （SD）系大鼠，雌性40只，体重（50.00±2.00）g，购自上海斯莱克凯实验动物有限责任公司[许可证号：SCXK（沪）2003-0003]。清洁级动物房，温度为（22.00±3.00）℃；相对湿度为50.00%～60.00%，12/12小时明暗周期；动物食用标准颗粒饲料，自由饮水和摄食。1.2.2 染毒动物模型的制备
1）EEDs染毒液的配置 精确称取壬基酚（4-NP）及双酚A（BPA）（颗粒状提前研磨至粉末），以市售精制大豆油为溶剂，逐滴加入大豆油至染毒物全部溶解或呈乳浊液状后，加入足量大豆油使其终浓度分别为10 mg/ml（4-NP）和40 mg/ml（BPA）。2）实验动物分组及标本处理
将实验动物随机分为5组，每组8只。
4-NP实验组 100 mg/kg（
1.0 ml/100 g）
4-NP治疗组 100 mg/kg（1.0 ml/100 g）+中药合剂40 ml/kg
BPA实验组 400 mg/kg（1.0 ml/100 g）
BPA治疗组 400 mg/kg（1.0 ml/100 g）+中药合剂40 ml/kg
溶剂对照组 溶剂10 ml/kg（1 ml/100 g）每天灌胃1次，疗程14 d。给药期间每天称重，根据体重调整药量。于末次给药24 h后称重，以3.00%水合氯醛腹腔麻醉处死。迅速剥离子宫称取湿重，计算脏器系数（子宫湿重/体重）。取两侧股骨去除肌肉及韧带组织后-20 ℃进行冻存待测。子宫称重后，中性固定24～48 h后进行石蜡包埋，连续切片，片厚5 μm，常规HE染色后镜检。
3）中药合剂的药物组成及制作 方法同临床部分。
1.2.3 评估方法
1）子宫内膜及平滑肌测量方法 Panasonic MV-CP410型摄像机进行图像采集，采用IMS细胞图像分析系统医学图像分析软件，放大倍数为100倍，测量HE切片子宫内膜上皮高度和平滑肌厚度。每张切片均随机选取4个视野，取平均值。2）子宫内膜上皮的细胞增殖核抗原（PCNA）蛋白表达的检测 采用常规免疫组化方法（ABC法）检测PCNA的表达，一抗为小鼠抗大鼠PCNA单克隆IgG2a抗体。以IMS细胞图像分析软件，测定子宫内膜上皮细胞PCNA阳性细胞的面积。每张切片均随机选取4个视野，取其平均值。
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