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摘要：第一部分胆酸类成分血药浓度测定策略的建立目的建立大鼠血清中胆酸类的Hplc-ELSD浅析测定策略，为两种牛黄血清药物化学及药代动力学探讨提供依据。策略（1）色谱柱：Agela Venusil MP C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱，0.2%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0ml·min-1；蒸发光散射检测器（ELSD）；柱温87.5℃，氮气流速2.0L·min-1，Impact OFF进行检测。（2）血清样品处理的策略：取血清100μl，加入甲醇900μl，涡旋混匀，12000rpm离心5min；取上清液，0.22μm微孔滤膜过滤；取滤液900μl，37℃水浴氮气吹干，固体残留物于-20℃低温冷冻保存，测定前取出备用。固体残留物用100μl流动相溶解，涡旋混匀，12000rpm离心5min，取20μl进样浅析。结果该浅析策略的检测限为1μg·ml-1，定量限为5μg·ml-1。重复性和稳定性考察RSD%值均小于3.91；提取回收率的RSD%值小于3.67。符合生物样品浅析策略的限度要求。结论本实验建立了测定大鼠血清中胆酸类含量的HPLC-ELSD法，该策略专属性强，样品处理策略简单、快捷，为药代动力学及血清药物化学的探讨提供了检测技术。第二部分天然牛黄与酶促牛黄胆酸类成分的血清中移行成分目的对灌胃给药天然牛黄与酶促牛黄的大鼠血清进行HPLC-ELSD、HPLC-MS浅析，确认二者的入血成分和血中移行成分，以药效物质基础方面论证酶促牛黄替代天然牛黄的可行性。策略（1）色谱柱：Agela Venusil MP C18(4.6mm×250mm，5μm)柱；流动相：乙腈（A），0.2%甲酸水（B），梯度洗脱，0min为30%A、70%B，15min为55%A、45%B，30min90%A、10%B；流速：1.0ml·min-1；柱温：25℃；检测器：蒸发光散射检测器。ELSD检测器：漂移管温度85℃；氮气流速2.0L·min-1；Impact OFF。（2）质谱条件。离子源：ESI源；检测方式：负离子检测；扫描方式：全离子扫描（SCAN）；扫描范围：100-1500amu；毛细管电压：4.0kV（正、负离子），碎裂电压：150V；源温度：99℃；去溶剂气：N2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：9L·min-1；干燥气压力：35psig。（3）血清样品预处理：取血清100μl，加入甲醇900μl，涡旋混匀，12000rpm离心5min；取上清液，0.22μm微孔滤膜过滤；取滤液900μl，37℃恒温水浴氮气吹干，固体残留物于-80℃低温冷冻保存，测定前取出备用。固体残留物用100μl流动相溶解，涡旋混匀，12000rpm离心5min，取20μl进样浅析。结果Wistar大鼠灌胃天然牛黄、酶促牛黄稳态含药血清样品图谱与空白血清Hplc-ELSD图谱相比较，确认给药天然牛黄后血中出现了10个移行成分，其中可以确定的成分为鹅去氧胆酸和去氧胆酸；给药酶促牛黄后血中出现了7个移行成分，已知成分为鹅去氧胆酸。结论在天然牛黄灌胃给药的大鼠血清中发现10个入血成分，两个已知入血成分去氧胆酸和鹅去氧胆酸。酶促牛黄灌胃给药的大鼠血清中发现7个入血成分，已知入血成分为鹅去氧胆酸。酶促牛黄和天然牛黄发挥药效的物质基础有着差别。第三部分牛黄中去氧胆酸与酶促牛黄中鹅去氧胆酸的药代动力学探讨目的通过所建立的胆酸类成分定量浅析策略测定灌胃给药牛黄后，胆酸类成分在大鼠体内的血药浓度，运用97软件计算药动学参数，旨在探讨牛黄中所含胆酸类成分在动物体内的药物动力学行为，为牛黄与酶促牛黄开发提供论述依据。策略（1）Wistar大鼠40只，随机分为4组，每组10只。分组灌胃单次给天然牛黄4.0g·kg-1、2.0g·kg-1，酶促牛黄3.8g·kg-1、2.0g·kg-1。给药后5min、10min、20min、30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、9h于尾尖取血约0.5ml。（2）取血清100μl，加入甲醇900μl，涡旋混匀，12000rpm离心5min；取上清液，0.22μm微孔滤膜过滤；取滤液900μl，37℃水浴氮气吹干，固体残留物用100μl流动相溶解，涡旋混匀，12000rpm离心5min，取20μl进样浅析，酶促牛黄组测定鹅去氧胆酸含量，天然牛黄组测定去氧胆酸含量。（3）采取97药动学软件进行自动拟合处理，以最佳房室模型为标准分别计算每只大鼠的主要药代动力学参数并求出均值，利用统计矩法求算AUC及MRT值，并求算各剂量的绝对生物利用度。结果（1）大鼠灌胃给天然牛黄后，去氧胆酸T(peak)约为0.72h，T1/2Ka约为0.16h，两种剂量条件下的分布相半衰期T1/2α约为1.4h，消除半衰期T1/2β约为6h；表观分布系数V/F均较小。两剂量组的去氧胆酸在体内的平均滞留时间MRT(0～∞)和MRT(0～t)没有显著差别，而AUC(0～∞)和AUC(0～t)差别显著，AUC与剂量呈正相关。（2）大鼠灌胃给酶促牛黄后，鹅去氧胆酸T(peak)约为0.78h，T1/2Ka约为0.35h，两种剂量条件下的分布相半衰期T1/2α约为0.9h、消除半衰期T1/2β约为6h，表观分布系数V/F高剂量显著大于低剂量组，达峰浓度C(max)、药—时曲线下面积AUC、清除率差别显著，高两剂量组的鹅去氧胆酸在体内的平均滞留时间MRT(0～∞)、AUC(0～∞)和AUC(0～t)差别显著，与剂量呈正相关。结论天然牛黄中去氧胆酸和酶促牛黄中鹅去氧胆酸在大鼠体内的药动学特点均符合二室模型。关键词：天然牛黄论文酶促牛黄论文血清药化论文药代动力学论文
中文摘要5-9
ABSTRACT9-14
符号说明14-15
第一部分 胆酸类成分血药浓度测定策略的建立15-34
前言15-16
材料16-18
策略18-21
结果21-30
讨论30-33
小结33-34
第二部分 天然牛黄与酶促牛黄胆酸类成分的血清中移行成分34-47
前言34-35
材料35-36
策略36-38
结果38-42
讨论42-46
小结46-47
第三部分 牛黄中去氧胆酸与酶促牛黄中鹅去氧胆酸的药代动力学探讨47-61
前言47-48
材料48-49
策略49-51
结果51-59
讨论59-60
小结60-61
结论61-62