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摘要：第一部分关于人偏肺病毒标准株病毒适合度的探讨目的人偏肺病毒(Human metapneumovirus hMPV)是2001年首次被分离的呼吸道病毒病原,可导致各年龄组人群呼吸道感染,以儿童感染为主,严重者威胁生命造成死亡,不仅如此,hMPV感染还与哮喘发生、进展有关。但目前针对hMPV感染,尚无可靠疫苗和治疗药物。病毒适合度(virai fitness)信息的获得,能够为疫苗的设计,病毒感染后病情、病程评估,药物选择及疾病的预后,提供有重要参考价值的信息,然而目前世界范围内对hMPV适合度的探讨未见报道。本探讨通过hMPV两亚型代表株NL/1/00(A亚型)与NL/1/99(B亚型)的体内外竞争性复制实验,检测不同标准株的相对适合度,对hMPV标准株适合度进行评价,提供国内外首份hMPV标准株适合度的浅析报告。策略1.将分别代表A、B两亚型的病毒株NL/1/00与NL/1/99以20：80、50：50、80：20混合成3个比例不同的混合病毒株。2个单独病毒株及3个混合株以相同的感染量分别接种于生长于6孔板中的各孔单层Vero-E6细胞,设置复孔及空白对照孔。病毒连续培养十几代,每代培养4-5天后将病毒液均放置于-80℃冰箱速冻保存,部分用于传代,部分用于提取病毒RNA,反转录成cDNA后,Real-Time PCR及核苷酸序列图谱法检测两个病毒株所占比例变化。2.将6-8周,雌性BALB/c小鼠随机分为6组,其中5组以滴鼻法分别接种上诉2个单独病毒株及3个混合株,每组每只小鼠接种病毒量均为50ul1×109copies/ul,剩余1组设为空白对照组。于感染后第1,2,4,6,8,13,17,20天处死小鼠取肺组织,提取病毒RNA后,反转录成用cDNA,用Real-Time PCR与核苷酸序列图谱法检测两个病毒株所占比例变化.结果在动物实验中,hMPV感染BALB/C小鼠后,可在小鼠体内复制存活约3周,于第4天到达复制高峰后病毒量逐渐减少,3周后检测不到病毒；20天内3个混合组均以NL/1/99所占比例为高,体现出较强的生长走势；空白对照组中未检测到hMPV感染。在细胞系统中,病毒共传代培养至12代,1-5代3组混合组均以NL/1/99占较高比例,6-8代以NL/1/00为主,第9始NL/1/99消失,只剩NL/1/00单独生长；空白孔未检测到hMPV感染。在单独感染NL/1/00和NL/1/99的动物及细胞系统中,均未检测到除此病毒株外的其余hMPV类型。结论动物实验中NL/1/99体现出较强的竞争复制优势,与细胞系中前期走势一致。细胞系统中NL/1/00和NL/1/99生长优势出现交替,与近些年来广泛报道的hMPV两亚型在人群中交替流行的现象相吻合。第二部分人偏肺病毒A与B基因型对小鼠致病性的观察目的通过观察人偏肺病毒(human metapneumovirus, hMPV)A和B亚型感染BALB/c小鼠后,小鼠在体重、病毒载量、病理及气道反应性等方面的转变,探讨两亚型病毒致病性上的差别,为hMPV的进一步探讨奠定基础。策略hMPV感染BALB/c动物模型后,通过利用Real-time PCR策略检测鼠肺内病毒载量的变化,肺功能检测仪监测小鼠气道反应性的变化及组织系统评分判定病理转变情况,来观测两亚型致病性的差别。结果hMPV两亚型感染组,在体重的动态监测、病毒载量、肺组织病理转变及气道反应性上均无统计学作用的差别。结论hMPV两基因型感染BALB/c小鼠的致病性无差别。关键词：人偏肺病毒论文标准株论文适合度论文人偏肺病毒论文基因型论文致病性论文
英文缩略词表5-6
摘要6-8
Abstract8-11
第一部分 关于人偏肺病毒标准株病毒适合度的探讨11-32
前言11-13
材料13-14
实验策略14-19
结果19-25
讨论25-27
结论27-28
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