试析突触抑郁模型大鼠海马突触蛋白质组学初步

摘要：背景抑郁症是由各种理由引起的以显著而持久的心境低落为主要临床特点的一类心境及情感障碍，其发病率、复发率和率高，就诊率和临床治愈率低，且主要累及青壮年人群。抑郁症在人群中的患病率是5%～10%，大约50％的服药病人仍然反复发作。抑郁症患者行为的发生率为28.5%～63.7%,大约有15%抑郁症患者最终死于。随着目前现代化、城市化加速和人口增加，人群将面对快节奏、高竞争、高拥挤及贫富差距加大的生活近况，抑郁症的发病率会越来越高。WHO预测，到2020年抑郁症将成为导致人类死亡和残疾的第二大疾病。由此，加强对抑郁症发病机制和防治的探讨，具有十分重要的战略作用。目的本实验旨在运用突触差别蛋白质组学技术，揭示可能的抑郁症突触分子生物学机制，本探讨可能给抑郁症的诊断治疗和抗抑郁药物的临床利用提供丰富的论述依据。策略本实验分三部分：第一部分，海马突触体提取策略的优化；第二部分，抑郁症大鼠模型的制备；第三部分，抑郁模型大鼠海马突触体差别蛋白质组学浅析。主要策略及技术路线如下：1.常用的组织匀浆策略有三种:液氮匀浆、手动玻璃匀浆和电动机械匀浆，为选择一个优化的匀浆策略，我们比较了上面陈述的三种不同匀浆策略结合差别密度梯度离心所提取的海马突触体效果，评价的指标是透射电镜的形态学观察和WB实验的突触蛋白纯度浅析。2．建立抑郁症大鼠模型，实验分为两组，抑郁组和对照组，对抑郁组进行慢性不可预见轻度刺激（CMS）。每周运用9种，连续4周，每周进行蔗糖水偏好试验，判断造模是否成功。3．取抑郁和对照大鼠海马组织，分别采取液氮匀浆策略和电动机械匀浆策略结合差别密度梯度离心法提取海马突触体，裂解提取突触体蛋白质，以Bradford法测定蛋白浓度，双向凝胶电泳分离蛋白，选择差别蛋白点进行基质辅助激光剖析电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF/TOF-MS）浅析。所得数据在SwissProt51.6/IPI数据库检索、鉴定蛋白质。并对兴趣蛋白进行WB验证。结果1.透射电镜形态学观察提示手动玻璃匀浆和电动机械匀浆策略所提取的突触体较液氮匀浆提取的突触体数目更多，更完整；WB浅析显示手动玻璃匀浆和电动机械匀浆策略提取的突触标志性蛋白Syntaxin纯度浅析无差别，但均较液氮匀浆的纯度高。2.两次动物造模至第4周时，抑郁组大鼠的糖水消耗量，糖水偏好度均降低，较对照组和基线比较有显著性差别（P 0.05）。3．利用液氮匀浆提取的抑郁和对照大鼠海马突触体，双向差别电泳-质谱浅析提示有16个差别蛋白质，这些蛋白质的功能分类为：囊泡调节/递质释放/信号转导，能量代谢，细胞骨架，物质代谢。与突触递质释放和信号转导直接相关的蛋白质有5个：突触素Ⅱ、膜联蛋白Ⅳ、Rab蛋白GDP-解离抑制因子β、脑型液泡ATP合酶亚单位B及G蛋白β2亚单位。4．利用电动机械匀浆提取的抑郁和对照大鼠海马突触体，双向差别电泳-质谱浅析提示有19个差别蛋白质，这些蛋白质功能分类为：突触的胞吞/胞吐，能量代谢，细胞骨架，分子伴侣。与突触的胞吞/胞吐相关的蛋白有6个：网格蛋白轻链A,网格蛋白轻链B，发动蛋白1，囊泡ATP合酶亚单位E1，突触素2及囊泡融合ATP酶。两个兴趣蛋白，网格蛋白轻链A/B,WB验证同双向电泳结果基本一致。结论1．手动的玻璃匀浆和电动的机械匀浆策略提取的突触效果相似，均比液氮匀浆策略提取的突触效果要好。2．两批CMS大鼠模型均体现出显著的快感缺失，与人类抑郁症核心症状及其相似，表明CMS抑郁大鼠模型已经成功建立。3．利用液氮匀浆策略进行的抑郁大鼠海马突触体差别蛋白质组学浅析，发现了一批与神经递质传递和信号转导直接相关的差别表达蛋白质，还包括一些突触能量、物质代谢和细胞骨架相关的差别表达信息。这可能是抑郁症中海马神经元突触传导障碍的病理性蛋白分子基础。4．利用电动机械匀浆策略进行的抑郁大鼠海马突触体差别蛋白质组学浅析，所鉴定到的差别蛋白主要涉及与突触的胞吐/胞吞相关的蛋白，这些蛋白的变化可能影响了突触的神经递质释放、突触囊泡的重回收和突触LTD的表达，故突触的胞吐/胞吞蛋白转变为抑郁症异常突触的传递和可塑性提供了新的证据，为抑郁症发病机制的探讨提供了新的线索。关键词：抑郁症论文慢性轻度应激论文蛋白质组学论文海马论文突触体论文
本论文由www.udooo.com,需要查抄袭率论文可以联系人员哦。

符号说明6-9

摘要9-13

ABSTRACT13-18

前言18-27

第一部分 抑郁症动物模型的建立27-43

前言27

1 材料与策略27-29

2 结果29-33

3 讨论33-40

4 小结40-41