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摘要：本论文根据睾丸酮丛毛单胞菌中3α-羟基类固醇脱氢酶/羰酰基还原酶是降解环境中甾体类激素的关键酶这一特点、其表达的抑制子蛋白RapA能够与3α-HSD启动子基因特异性结合这一原理、甾体类激素能够使萤火虫荧光发光淬灭这一现象,利用基因工程重组技术以质粒P6为模板构建了调控质粒pUC-4289,将报告基因萤火虫荧光素酶基因连接到了3α-HSD基因启动子后面,构建了报告质粒pK-3a-LUC,将其分别转化大肠杆菌HB101,并制备了相应的调控非细胞系统和报告非细胞系统,以而建立了检测甾体类激素的生物化学发光检测策略,发光强度与甾体类激素浓度呈负相关。对其策略学进行了优化,并初步运用,与Hplc检测结果进行了比较,证明了该策略可行。该策略是一种灵敏、快速、易操作、高通量、成本低、能检测环境中所有已知及未知甾体类激素的新型检测策略,在环境监测和食品安全等领域具有较大实用价值。关键词：甾体类激素论文萤火虫荧光素酶论文非细胞系统论文生物化学发光检测策略论文
摘要4-5
ABSTRACT5-6
目录6-7
第一章 绪论7-21
1.1 引言7-8
1.2 甾体类激素污染的理由、近况和影响8-11
1.3 检测、定量环境中甾体类激素的策略11-16
1.4 新型检测策略的提出16-19
1.5 本课题探讨的目的、内容和原理19-21
第二章 重组调控质粒及报告质粒的构建21-35
2.1 实验材料21-23
2.2 实验策略23-31
2.3 实验结果31-33
2.4 实验结果的讨论33-35
第三章 建立生物化学发光策略用以检测甾体类激素35-59
3.1 实验材料35-37
3.2 实验策略37-44
3.3 实验结果44-56
3.4 实验结果的讨论56-59
第四章 生物化学发光法检测甾体类激素的运用59-67
4.1 实验材料59-60
4.2 实验策略60-62
4.3 实验结果62-65
4.4 实验结果的讨论65-67
结论67-69
致谢69-70