本站原创摘要4-6
ABSTRACT6-16
第一章 绪论16-26
1.1 3-羟基丙酸概况16-20
1.1.1 3-羟基丙酸的理化性质及用途16-17
1.1.2 3-羟基丙酸的合成策略17
1.1.3 生物法生产 3-羟基丙酸的途径17-19
1.1.4 生产菌株19-20
1.2 全局转录调控机器工程20-22
1.2.1 原理20-21
1.2.2 全局转录调控在改善细胞表型中的运用和优势21-22
1.3 同源重组技术与 RecA 重组系统22-24
1.3.1 同源重组技术22-23
1.3.2 RecA 重组系统23-24
1.4 插入序列24-25
1.5 本课题的探讨作用25-26
第二章 全局转录调控法生产 3-羟基丙酸的探讨26-42
2.1 引言26
2.2 实验材料26-27
2.2.1 菌株与质粒26
2.2.2 试剂与仪器26-27
2.2.3 培养基27
2.3 实验策略27-34
2.3.1 K.pneumoniae 基因组总 DNA 的提取27-28
2.3.2 聚合酶链式反应(PCR)扩增 K.pneumoniae 的首要σ因子基因 rpoD28
2.3.3 构建含有未突变基因 rpoD 的表达载体 pET-PK-wrpoD28-29
2.3.4 阳性克隆 E.cop(pET-PK-wrpoD)的鉴定29-30
2.3.5 对照菌 K.p(pET-PK-wrpoD)的构建30-31
2.3.6 易错 PCR 扩增基因 rpoD31
2.3.7 构建基因 rpoD 突变库31-32
2.3.8 工程菌 K.p(pET-PK-mrpoD)的鉴定32
2.3.9 工程菌 K.p(pET-PK-mrpoD)的发酵32-33
2.3.10 生长曲线的绘制和底物甘油消耗的测定33
2.3.11 高效液相色谱（Hplc）检测发酵液中产物 3-HP 的产量33
2.3.12 高产工程菌突变基因 rpoD 的测序鉴定33-34
2.4 结果与讨论34-40
2.4.1 K.pneumoniae 基因组总 DNA 的提取34
2.4.2 PCR 扩增 K.pneumoniae 的首要σ因子基因 rpoD34-35
2.4.3 阳性克隆 E.cop（pET-PK-wrpoD）的鉴定35-36
2.4.4 对照菌 K.p(pET-PK-wrpoD)的构建36
2.4.5 易错 PCR 扩增基因 rpoD 的最优条件和突变库的构建36-37
2.4.6 重组菌 K.p(pET-PK-mrpoD)阳性克隆的筛选37-38
2.4.7 重组菌 K.p(pET-PK-mrpoD)发酵生产 3-HP38-40
2.4.8 突变 rpoD 基因的序列浅析40
2.5 本章小结40-42
第三章 E.cop 醛脱氢酶（aldH）的克隆与表达42-54
3.1 引言42
3.2 实验材料42-43
3.2.1 菌株与质粒42
3.2.2 试剂与仪器42
3.2.3 培养基42-43
3.3 实验策略43-46
3.3.1 E.cop 基因组总 DNA 的提取43
3.3.2 E.cop 醛脱氢酶基因 aldH 的克隆43-44
3.3.3 构建表达载体 pET-PK-aldH44-45
3.3.4 阳性克隆 E.cop(pET-PK-aldH)的鉴定45
3.3.5 工程菌 K.p(pET-PK-aldH)的构建45
3.3.6 醛脱氢酶基因 aldH 在 K.pneumoniae 中的表达45-46
3.3.7 重组菌 K.p(pET-PK- aldH)发酵生产 3-HP46
3.3.8 生长曲线的绘制和底物甘油消耗的测定46
3.3.9 Hplc 检测发酵液中产物 3-HP 的产量46
3.4 结果与讨论46-52
3.4.1 E.cop 基因组总 DNA 的提取46-47
3.4.2 PCR 扩增 E.cop 的醛脱氢酶基因 aldH47
3.4.3 表达载体 pET-PK-aldH 的鉴定47-48
3.4.4 重组菌 K.p(pET-PK-aldH)的构建48-49
3.4.5 醛脱氢酶基因 aldH 在 K.pneumoniae 中的表达49-50
3.4.6 重组菌 K.p(pET-PK-aldH)发酵生产 3-HP50-52
3.5 本章小结52-54
第四章 同源重组对策生产 3-羟基丙酸的探讨54-70
4.1 引言54
4.2 实验材料54-55
4.2.1 菌株与质粒54
4.2.2 试剂与仪器54
4.2.3 培养基54-55
4.3 实验策略55-61
4.3.1 同源重组片段的设计55
4.3.2 AD 各组成部分的克隆55-57
4.3.3 overlap PCR 克隆片段 AB、CD57-58
4.3.4 重组质粒 pET-AB 的构建58-59
4.3.5 重组质粒 pET-AD 的构建59-60
4.3.6 同源重组构建重组菌 KpAD60
4.3.7 重组菌 KpAD 的蛋白表达60-61
4.3.8 重组菌 KpAD 发酵生产 3-HP61
4.4 结果与讨论61-69
4.4.1 PCR 扩增 AD 各组成部分61-62
4.4.2 overlap PCR 扩增 AB、CD62
4.4.3 重组质粒 pET-AB 的鉴定62-63
4.4.4 重组质粒 pET-AD 的鉴定63-64
4.4.5 PCR 扩增同源重组片段 AD64-65
4.4.6 重组菌 KpAD 的鉴定65-66
4.4.7 重组菌 KpAD 的蛋白表达66-67
4.4.8 重组菌 KpAD 发酵生产 3-HP67-69
4.5 本章小结69-70
第五章 总结与倡议70-74
5.1 结论70-71
5.2 革新点71
5.3 不足与倡议71-74