本站原创摘要3-5
Abstract5-11
第一章 绪论11-21
1.1 食物过敏及其危害11-12
1.1.1 食物过敏11
1.1.2 食物过敏危害11
1.1.3 食物过敏原及其特点11-12
1.2 牛乳过敏及其主要过敏原12-13
1.2.1 牛乳过敏12-13
1.2.2 牛乳及乳制品中主要过敏原13
1.3 食物过敏诊断及过敏原检测13-16
1.3.1 食物过敏临床诊断13-14
1.3.2 过敏原检测14-15
1.3.3 牛乳蛋白过敏原的检测15
1.3.4 过敏原检测策略评析15-16
1.4 单克隆抗体技术及其在食品检测中的运用16-18
1.4.1 单克隆抗体技术16-17
1.4.2 单克隆抗体的优点17
1.4.3 单克隆抗体运用17-18
1.5 荧光量子点标记技术及其在食品检测中运用18-19
1.5.1 量子点及其光学特性18-19
1.5.2 量子点在食品检测中运用19
1.6 探讨目的、作用及主要内容19-21
第二章 牛乳α-乳白蛋白的分离纯化21-32
2.1 引言21
2.2 材料与仪器21-22
2.2.1 主要试剂21
2.2.2 主要仪器21-22
2.3 主要溶液的配制22-23
2.3.1 柱层析溶液22
2.3.2 SDS-PAGE电泳溶液22-23
2.3.3 蛋白浓度测定所需溶液23
2.4 实验策略23-26
2.4.1 浓缩乳清的制备23
2.4.2 牛乳α-乳白蛋白的分离纯化23-26
2.5 结果与浅析26-30
2.5.1 离子交换层析初步分离26-27
2.5.2 凝胶过滤层析进一步纯化α-乳白蛋白27-29
2.5.3 纯化历程中蛋白质含量和得率变化29-30
2.6 讨论30-31
2.6.1 离子交换层析30
2.6.2 凝胶过滤层析30-31
2.7 本章小结31-32
第三章 抗牛乳α-乳白蛋白单克隆抗体的制备32-48
3.1 引言32-33
3.2 材料与仪器33-34
3.2.1 主要材料33
3.2.2 主要试剂33
3.2.3 主要仪器33-34
3.3 主要溶液的配制34-36
3.3.1 细胞培养相关溶液34
3.3.2 ELISA相关溶液配制34-35
3.3.3 免疫印迹相关溶液配制35-36
3.3.4 抗体纯化相关溶液配制36
3.4 实验策略36-40
3.4.1 小鼠免疫及免疫效果的监测36
3.4.2 间接ELISA测抗血清效价36-37
3.4.3 制备饲养细胞37
3.4.4 骨髓瘤细胞复苏培养37
3.4.5 杂交瘤细胞的制备及筛选37-38
3.4.6 阳性杂交瘤细胞的亚克隆、筛选及扩大培养38
3.4.7 细胞冻存38
3.4.8 体内诱生腹水法大量制备单抗38
3.4.9 方正滴定确定最佳腹水效价测定条件38
3.4.10 腹水中单克隆抗体的纯化38-39
3.4.11免疫印迹及间接竞争ELISA检测单抗特异性39-40
3.4.12 间接竞争ELISA测定单抗与其它牛乳过敏原的免疫交叉反应40
3.5 结果与浅析40-45
3.5.1 免疫历程中小鼠抗血清效价的变化40
3.5.2 杂交瘤细胞筛选40-41
3.5.3 方正滴定确定最佳包被抗原浓度及二抗稀释度41-42
3.5.4 单抗腹水纯化及浓度测定42-43
3.5.5 间接竞争ELISA检测单抗特异性43-44
3.5.6 腹水单抗交叉反应性探讨44
3.5.7 交叉反应率计算44
3.5.8 免疫印迹检测单抗特异性44-45
3.6 讨论45-47
3.6.1 动物的免疫45-46
3.6.2 单抗的制备46-47
3.6.3 抗体的纯化及其特性47
3.7 本章小结47-48
第四章 荧光量子点标记单克隆抗体48-59
4.1 引言48-49
4.2 材料与仪器49
4.2.1 主要试剂49
4.2.2 主要仪器49
4.3 主要溶液的配制49-50
4.4 实验策略50-51
4.4.1 量子点偶联50
4.4.2 偶联混合物纯化50
4.4.3 斑点印迹50-51
4.4.4 荧光发射光谱浅析51
4.5 结果与浅析51-56
4.5.1 量子点偶联抗体条件的优化51-53
4.5.2 偶联产物的纯化53-54
4.5.3 斑点印迹54-55
4.5.4 荧光发射光谱浅析55-56
4.6 讨论56-57
4.7 本章小结57-59
第五章 量子点标记单克隆抗体检测食品中过敏原α-乳白蛋白59-71
5.1 引言59
5.2 材料与仪器59-60
5.2.1 主要试剂59
5.2.2 主要仪器59-60
5.3 主要溶液配制60
5.4 实验策略60-63
5.4.1 间接ELISA61
5.4.2 间接竞争ELISA61
5.4.3 竞争蛋白与单克隆抗体最佳体积配比的确定61-62
5.4.4 样品前处理62
5.4.5 斑点印迹定性检测62
5.4.6 间接竞争ELISA标准曲线的绘制62
5.4.7 间接竞争FLISA标准曲线绘制62-63
5.4.8 精确度63
5.4.9 半抑制量浓度与最低检出限63
5.4.10 样品检测63
5.5 结果与浅析63-69
5.5.1 最佳抗体稀释度及包被浓度的确定63-64
5.5.2 竞争反应中最佳反应混合物体积配比64-65
5.5.3 斑点印迹定性检测浅析65
5.5.4 间接竞争ELISA及间接竞争FLISA标准曲线的绘制65-66
5.5.5 精确度66-68
5.5.6 半抑制量浓度及最低检出限68
5.5.7 样品检测68-69
5.6 讨论69-70
5.7 本章小结70-71
第六章 全文总结71-73
6.1 本论文主要探讨结果71-72
6.2 倡议与展望72-73
致谢73-74