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简谈磷酸酶基于CaNNFAT3信号转导通路四逆汤与附子有效成分治疗心力衰竭大鼠分子机制查抄袭率

收藏本文 2024-02-18 点赞:9245 浏览:21575 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:探讨背景:慢性心力衰竭是临床上非常常见的危重病症,是各种心血管疾病的最终转化结果,目前证实在心衰的发生历程中钙调磷酸酶(calcineurin,CaN)发挥了极其重的作用,同时在近几年心衰的探讨中发现了一条由CaN信号分子所介导的CaN-NFAT3信号转导通路,其在心衰的发生历程中发挥了关键的调控作用,在慢性心力衰竭发生时,心肌组织中的CaN活性普遍增高,且发现外周血中CaN活性的升高与左心室肥厚程度成正比。而CaN是目前为止所认识到的唯一一种受Ca2+/钙调素调节的丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶,其作用时可使细胞浆中的T细胞活化核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFATc)去磷酸化,进而引起NFATc向核内转位的一系列反应以及后续的转录活动,探讨已经证实其主要生理底物为活化T细胞核因子3(nuclear factor of activated T cells3,NFAT3)、三磷酸肌醇(inositol trisphosphate,IP3)受体等,其在机体的免疫、心血管和神经系统中发挥了重要的调控作用。西医对慢性心力衰竭的治疗往往是采取毒毛旋花子甙等强心苷类药物进行治疗,然该类药物治疗量与中毒量极其接近,且对各脏器的毒副作用较大,许多患者往往是死于本类药物的毒副作用。近年来通过心衰治疗的临床观察与实验探讨发现,中医药治疗慢性心力衰竭具有其独特的优势,具有毒副作用小,对收缩不能性和舒张不能性的急慢性心力衰竭均有较好疗效的特点。由此,本课题以中医辨证论治论述为基础,以中医药独特优势为出发点,采取温补心阳为主的治法,探讨中医经典方“四逆汤”及附子有效成分在阿霉素所致的慢性心力衰竭大鼠中对CaN所介导的CaN-NFAT3信号转导通路的调控作用,最终揭示四逆汤及附子有效成分治疗慢性心力衰竭大鼠的分子机制。探讨目的:浅析CaN-NFAT3信号转导通路在四逆汤及附子有效成分治疗慢性心力衰竭历程中的分子机制。探讨策略:取清洁级SD大鼠100,随机抽取20只作为空白对照组外,其余80只采取连续腹腔注射盐酸阿霉素的(每次0.0025g.kg-1,每周1次,连续6周)策略复制大鼠慢性心力衰竭模型,待造模成功后将动物分为两部分进行实验,第一部分进行四逆汤治疗实验,第二部分进行附子有效成分——附子苷治疗实验。第一部分实验:将造膜成功的大鼠随机分为模型对照组、四逆汤治疗组、地高辛治疗组、空白对照组。四逆汤治疗组给予7倍于人体有效用量的四逆汤煎剂,即每日2.8g/kg(人体体重以60kg为标准,四逆汤:附子10g,干姜9g,甘草6g),模型对照组给予相同体积1ml/100g的生理盐水灌胃,阳性对照组给予地高辛0.1mg/kg,均于每天早上灌胃1次,连续治疗7周,后分别用CaN活性试剂盒、钙含量试剂盒、NFATc蛋白相对表达试剂盒、IL-2和IL-4试剂盒等,分别检测CaN的活性、心肌钙含量、去磷酸化NFATc蛋白的相对表达,IL-2和IL-4的含量等指标。第二部分实验:将造模成功的大鼠随机分为模型对照组(N=10)、附子苷高剂量组(N=10)、附子苷中剂量组(N=10)、附子苷低剂量组(N=10),均采取灌胃给药,附子苷高剂量治疗组给予14倍于人体用量(以生附子人体煎服用量10g/天,体重为60kg为标准),即每日给予0.7mg/kg,中剂量治疗组每日给予0.35mg/kg,低剂量治疗组每日给予0.18mg/kg,在给药之前将中剂量组与低剂量组分别稀释2倍与4倍,使高、中、低剂量组同体积,模型对照组给予同体积生理盐水灌胃,附子苷治疗组与模型对照组均于早上灌胃1次,连续治疗8天。结果:慢性心衰大鼠经过四逆汤及附子苷治疗后,心肌细胞的变性坏死显著改善,大鼠血流动力学指标好转,四逆汤治疗组CaN活性均低于模型组(P0.01)、钙含量降低(P0.01)、大鼠心肌组织中NFATc/β-actin光密度比值较模型对照组降低(P0.01)等。结论:CaN-NFAT3信号转导通路的抑制为四逆汤及附子苷治疗慢性心力衰竭的关键分子机制。关键词:四逆汤论文附子苷论文慢性心力衰竭论文钙调磷酸酶-活化T细胞核因子3论文信号转导论文分子机制论文
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    中文摘要2-4

    ABSTRACT4-9

    英文縮写词表9-12

    引言12-14

    实验探讨14-17

    1 实验材料14-17

    1.1 实验药物14-15

    1.1.1 受试药物14-15

    1.1.1.1 四逆汤的制备14

    1.1.1.2 附子有效成分——附子苷的提取14-15

    1.1.2 阳性药物15

    1.1.3 造模药物15

    1.2 实验动物15

    1.3 实验场地15

    1.4 实验仪器15-16

    1.5 实验试剂16-17

    第一部分 四逆汤治疗慢性心衰大鼠实验探讨17-26

    2 实验策略17-20

    2.1 大鼠慢性心力衰竭模型的复制17

    2.2 四逆汤治疗慢性心力衰竭大鼠血流动力学指标的观察17-18

    2.3 四逆汤治疗慢性心力衰竭大鼠心肌组织CaN测定实验18

    2.4 四逆汤治疗慢性心力衰竭大鼠心肌组织Ca~(2+)测定实验18

    2.5 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织NFATc测定实验18

    2.6 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织IL-2、IL-4含量测定实验18-19

    2.7 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织NO含量测定实验19

    2.8 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织NOS含量测定实验19

    2.9 四逆汤治疗慢性心衰大鼠红细胞膜Na~+-K~+-ATP酶活性测定实验19-20

    2.10 四逆汤治疗慢性心衰大鼠血清AST含量测定实验20

    2.11 四逆汤治疗慢性心衰大鼠血清LDH含量测定实验20

    2.12 四逆汤治疗慢性心衰大鼠血清CK含量测定实验20

    2.13 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织病理学观察实验20

    3 实验结果20-26

    3.1 大鼠死亡率与一般情况观察20-21

    3.2 四逆汤治疗慢性心衰大鼠血流动力学指标观察21

    3.3 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织各项指标检测21-24

    3.3.1 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织CaN指标观察21-22

    3.3.2 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织Ca~(2+)指标观察22

    3.3.3 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织NFATc指标观察22

    3.3.4 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织IL-2指标观察22

    3.3.5 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织IL-4指标观察22-23

    3.3.6 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织NO指标观察23

    3.3.7 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织NOS指标观察23

    3.3.8 四逆汤治疗慢性心衰大鼠红细胞膜Na~+-K-ATP酶活性测定观察23

    3.3.9 四逆汤治疗慢性心衰大鼠血清AST、LDH、CK指标观察23-24

    3.4 四逆汤治疗慢性心衰大鼠心肌组织病理学观察24-26

    第二部分 附子苷治疗慢性心衰大鼠的实验探讨26-56

    4 实验策略26-27

    4.1 附子苷治疗慢性心力衰竭大鼠血流动力学指标的检测26

    4.2 CaN在附子苷对慢性心力衰竭调控历程中的靶向实验26-27

    5 实验结果27-29

    5.1 附子苷治疗慢性心衰大鼠血流动力学指标与CaN指标检测27-29

    5.1.1 附子苷治疗慢性心衰大鼠血流动力学指标观察27-28

    5.1.2 附子苷治疗慢性心衰大鼠CaN指标的观察28-29

    6 讨论29-56

    6.1 心力衰竭的国内外探讨29-32

    6.1.1 国外探讨29-30

    6.1.2 国内探讨30-32

    6.2 洋地黄治疗心力衰竭的近况浅析32-34

    6.3 四逆汤探讨近况34-37

    6.3.1 四逆汤处方来源34

    6.3.2 四逆方解34

    6.3.3 四逆汤现代药理探讨34-36

    6.3.4 四逆汤“君药”——附子有效成分治疗心衰的现代探讨36-37

    6.4 四逆汤治疗慢性心力衰竭的机制浅析37-40

    6.4.1 CaN在四逆汤治疗慢性心衰历程中的靶向作用37

    6.4.2 去磷酸化NFATc蛋白的相对表达为四逆汤治疗慢性心衰提供分子基础37-38

    6.4.3 四逆汤治疗慢性心衰与其调控CaN-NFAT3信号转导通路的机制浅析38-40

    6.4.4 运用四逆汤治疗后CaN-NFAT3信号转导通路各信号分子调控示意图40

    6.5 阿霉素复制大鼠慢性心力衰竭模型的功能评价40-42

    6.6 四逆汤治疗慢性心力衰竭大鼠各项检测指标的浅析42-56

    6.6.1 对慢性心力衰竭大鼠血流动力学的影响42-46

    6.6.1.1 对左室最大压力上升速率的影响44

    6.6.1.2 对左室舒张末压的影响44-45

    6.6.1.3 对左室收缩压的影响45

    6.6.1.4 对动脉收缩压与动脉舒张压的影晌45-46

    6.6.1.5 对心率的影响46

    6.6.2 对慢性心衰大鼠心肌组织CaN的影晌46-47

    6.6.3 对慢性心衰大鼠心肌组织NFAT3的影响47-48

    6.6.4 对慢性心衰大鼠心肌组织Ca~(2+)的影响48-49

    6.6.5 对慢性心衰大鼠心肌组织IL-2、IL-4的影晌49-50

    6.6.6 对慢性心衰大鼠心肌组织NO的影响50-51

    6.6.7 对慢性心衰大鼠心肌组织NOS的影响51-52

    6.6.8 对慢性心衰丈鼠红细胞Na+-K--ATP的影胸52-53

    6.6.9 对慢性心衰大鼠血清AST、LDH、CK的影响53-54

    6.6.10 对实验大鼠心肌病理学的影响54-56

    总结56-57

    不足与展望57-58

    致谢58-59

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