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摘要：目的：1.探索最佳提取分离、衍生化方法和色谱条件,选择合适的内标物,建立大鼠脑区兴奋性神经递质谷氨酸(glutamic acid, Glu)、天冬氨酸(aspartic acid, Asp)、甘氨酸(glycine, Gly)和亮氨酸(leucine, Leu)的高效液相色谱(high-performance pqid chromatography, Hplc)同时定量分析方法。2.用所建立的方法,同时测定注射后大鼠脑区的前额叶皮质、海马、杏仁体和体中的Glu、Asp、Gly和Leu含量。3.对实验数据统计学分析,阐明对大鼠脑区兴奋性神经递质的影响。4.探讨病理生理作用与大鼠脑区的兴奋性氨基酸含量变化之间的联系。方法：1. HPLC法同时测定注射后的大鼠脑区的前额叶皮质、海马、杏仁体和体中兴奋性神经递质Glu、Asp、Gly和Leu的含量。以超纯水与无水乙醇的混合溶剂(4：1,V/V)超声萃取大鼠脑组织中的Glu、Asp、Gly和Leu。以正亮氨酸(norleucine, Nor-leu)为内标物,正亮氨酸和提取物用乙腈、三乙胺(triethylamine, TEA)和异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate, PITC)的混合溶剂(8：1：1,V/V/V)衍生化,以0.1mol/L醋酸钠溶液(加冰醋酸调pH为5.4)和乙腈作为流动相梯度洗脱。保留时间定性,内标工作曲线法定量。2.按随机数字表分组,将54只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为空白对照组(n=6)、生理盐水对照组(n=6)和实验组。实验组分为连续注射3d、5 d、7d、9d、11d、13d和15d共7个组,每组n=6。分别对每组动物编号。生理盐水对照组和实验组大鼠均腹腔注射给药,并于末次给药后15min处死。大鼠对照其脑立体定位谱图,分离出所测脑区,经处理后用HPLC检测其兴奋性神经递质含量,并SPSS软件对定量分析结果统计学分析。结果：1.对于兴奋性神经递质Asp、Glu、Gly和Leu,分析方法在0.1-200μg/mL的浓度范围内线性关系良好,系数γ0.9998。对Asp、Glu、Gly和Leu最低检测限分别为40.5ng/mL、4ng/mL、47.6ng/mL和8.4ng/mL,回收率93.7%,日内精密度RSD3%,日间精密度RSD10%。2.在前额叶皮质中,与空白组比较时,Asp、Glu和Leu的含量在给于注射后开始降低,Asp在5d降到最低值,在3d～15d组有性差异(p0.05)；Glu在13d降到最低值,在3d～15d组中有性差异(p0.01)；Leu在7d降到最低值,在3d,5d,7d和11d中有性差异(p0.05)；Gly的含量在给于注射后既有降低也有升高,Gly在5d时降到最低值,在9d上升到最高值,在3d～13d组有性差异(p0.05)。与生理盐水组比较时发现,Asp、Glu和Leu的含量在给于注射后既有升高也有降低,Asp和Glu在3d时升高到最高值,Asp在3d～15d组有性差异(p0.05),Glu在3d～15d组有性差异(p0.01)；Leu在13d升到最高值,并且13d和15d的含量变化基本稳定,Leu在5d、7d、9d、13d和15d组有性差异(p0.05)；Gly的含量在给于注射后开始上升,在9d上升到最高值,Gly在3d—15d组有性差异(p0.05)。3.在海马中,与空白组比较时,Asp和Glu的含量在给于注射后开始降低,Asp在5d降到最低值,在3d～15d组中有性差异(p0.05)；Glu在15d降到最低值,在3d～13d组有性差异(p0.01)；Gly在5d时降到最低值,在13d上升到最高值,在5d～15d组有性差异(p0.05)；Leu在7d降到最低值,13d升到最高值,并且13d和15d的含量变化基本稳定,Leu在3d、5d、7d、11d和15d组有性差异(p0.05)。与生理盐水组比较时发现,Asp、Glu、Gly和Leu的含量在给于注射后既有升高也有降低,Asp和Glu在3d升高到最高值,Asp在3d～13d组有性差异(p0.01),Glu在3d,7～15d组有性差异(p0.05)；Gly在13d升高到最高值,在3d～13d组都有性差异(p0.01)；Leu在13d升到最高值,在3d、7d、9d、13d、15d组都有性差异(p0.01)。4.在杏仁体中,与空白组比较时,Asp和Glu的含量在给于注射后开始降低,Asp在5d降到最低值,在3d～13d组都有性差异(p0.01)；Glu在13d降到最低值,在3d～15d组都有性差异(p0.01)；Gly和Leu的含量在给于后既有升高也有降低,Gly在13d升到最高值,5d时降到最低值,Gly在3d-15d组都有性差异(p0.05)；Leu在13d上升到最高值,在7d降到最低值,在3d、5d、7d、11d和13d组有性差异(p0.01)。与生理盐水组比较时发现,Asp和Glu的含量在给于注射后开始降低,Asp在5d降到最低值,在3d、5d、7d、11d和13d组有性差异(p0.05)；Glu在13d降到最低值,在3d-15d组有性差异(p0.01)；Gly的含量在给于后既有升高也有降低,Gly在13d时升到最高值,在3d-7d,1ld-15d组有性差异(p0.05)；Leu的含量在给于注射后开始升高,在13d升高到最高值,在3d-15d组有性差异(p0.05)。5.在体中,与空白组比较时,Asp、Glu和Leu的含量在给于注射后开始降低,Asp和Leu在11d降到最低值,Glu在13d降到最低值,Asp和Glu在3d-15d组有性差异(p0.01)；Leu在3d-11d组都有性差异(p0.01)；Gly的含量在给于后既有升高也有降低,Gly在9d升到最高值,11d时降到最低值,在3d、7d、9d、11d和15d组有性差异(p0.05)。与生理盐水组比较时发现,Asp、Glu和Leu的含量在给于注射后既有升高也有降低,Asp和Glu在3d升到最高值,Asp在5d和1ld组有性差异(p0.05),Glu在3d-15d组有性差异(p0.01)；Leu在15d升高到最高值,在5d,9d-15d组有性差异(p0.05)；Gly的含量在给于后升高,在9d升到最高值,在5d、7d、9d、13d和15d组有性差异(p0.05)。：1.建立了高灵敏度、高选择性、高回收率、简便快捷的的大鼠脑区中Glu、Asp、Gly和Leu定量分析方法。2.对大鼠前额叶皮质、海马、杏仁体和体中Asp、Glu、Gly和Leu含量有不同的影响,其中Asp、Glu和Leu在所测脑区中含量变化最。相对于空白组,Asp和Glu含量呈现降低趋势,Gly含量变化不是很大,既有升高也有降低,Leu在所测脑区中的含量都比较少,含量既有升高也有降低。导致这一变化的原因,可能是作用于NMDA受体引起的。关键词：论文兴奋性神经递质论文高效液相色谱论文
英文缩写5-6
中文摘要6-9
Abstract9-13
论文13-51
引言13-15
和方法15-19
结果19-35
讨论35-41
41-42