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摘要：研究背景2型糖尿病(type 2 diabetes, T2D)是一种常见的多因素疾病,由遗传因素和环境因素共同作用而发病。2007年初明确了单基因糖尿病的分子遗传学基础之后确定了2型糖尿病的特异基因。这些遗传学研究的发现提示遗传因子可以用来推测T2D的遗传易感性,从而用于糖尿病的预测、预防和早期诊断。在已经确定的18个T2D易感基因变异中以TCF7L2的rs7903146变异、KCNJ11的rs5219 (E23K)变异以及PPARG的rs 1801282 (Pro 12Ala)变异最为。本研究中所选候选基因FOXO1和HNF4A系PPARG胰岛素信号通路中的转录元件,在肝脏和脂肪的胰岛素信号传递中起着非常的作用。FOXO1是糖异生基因启动子的共激活因子,可以在胰岛素抵抗下调节β细胞增殖；HNF4A可以激活上百个基因的表达,尤其是与葡萄糖、脂肪酸、胆固醇等中间代谢的基因,因此均可作为检测T2D遗传易感性的候选基因。另外,因近期有研究,ADRA2A基因表达增加会抑制胰岛素的分泌并证明与白种人T2D；儿茶酚胺与能量代谢,所以调控儿茶酚胺的基因在肥胖的发生中起着的作用,ADRA2A就是其中的一个。本研究应用以人群为基础的病例对照研究方法,以FOXO1和HNF4A为候选基因分析其基因多态性与中国汉族人群T2D遗传易感的关联性,并且研究这两个基因对T2D的发生具有协同效应。同时也阐明了ADRA2A基因的多态性与中国汉族人T2D及体重指数(BMI)的关系。研究方法本研究非匹配病例-对照研究方法,以577例2型糖尿病患者为病例组(type 2 diabetic patients, T2D),以462例非糖尿病健康受试者为对照组(non diabetic subjects, ND),聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphi, PCR-RFLP)法和TaqMan探针法检测FOXO1基因以及HNF4A基因的单核苷酸多态性位点(Single nucleotide polymorphis, SNPs);随后探讨这两个候选基因的多态性与T2D遗传易感的性。本研究还1042例2型糖尿病患者和1052例非糖尿病健康受试者开展ADRA2A基因多态性研究,用TaqMan探针法对ADRA2A的两个SNPs (rs521674和rs553668)基因分型。应用SPSS 16.0软件包分析数据。用SHEsis在线软件(analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php)计算两个多态性位点间连锁不平衡系数(D')和r2值并构建单倍型,用PS软件(Power and Sample Size Calculations Version2.1.30)计算研究所能达到的统计学效力。用MDR version 2.0 beta 6软件计算基因-基因交互作用。以双侧P0.05为具有统计学性差异。研究结果1.FOXO1基因多态性与T2D的性本研究发现4个SNPs(rs270185、rs9549240、rs9549241、rsl2585277)之间强连锁(r20.90),因此选择4个SNPs(rs17592236、rs2701859、rs3908773、rs4435111)继续分型。单个位点分析及单倍型分析均发现病例组与对照组中具有差异。2. HNF4A基因多态性与T2D的性本研究选择了6个SNPs位点(rs6031558、rs4812831、rs717247、rs3212172、rs6031587、rs11574736)基因分型。SNP位点rs11574736的等位基因及基因型频率在T2D病例组和非DM对照组均差异(17.3% vs.22.2%,P=0.005,OR=0.74,95%CI=0.59-0.92; 3.3%vs.5.0%, P=0.02)。6个位点组成的常见单倍型H7(C-G-T-A-C-C)、H8(C-G-T-A-T-G)在病例组的频率低于对照组(2.8%vs.5.7%, P=0.001, OR=0.48,95%CI=0.31-0.76; 3.8%vs.6.4%, P=0.008, OR=0.58, 95%CI=0.39-0.87)。3. FOXO1和HNF4A基因多态性与T2D性的交互作用用多因子降维法(MDR)分析基因-基因交互作用,经过1000次置换检验,发现rs717247/rs6031587/rs11574736模型是最佳模型(testing accuracy= 0.58, CV consistency= 8/10),这在HNF4A基因中这三个位点间作用。次于上述三位点模型的是一个四位点模型：rs3908773/rs717247/rs6031587/rs11574736 (testing accuracy= 0.55, CV consistency= 6/10),提示FOXO1与HNF4A基因间交互作用,单个位点分析HNF4A基因中rs11574736位点的阳性结果,推测HNF4A基因在交互作用中处于主动地位。4. ADRA2A基因多态性与T2D的性单个位点分析,SNP位点rs553668的等位基因频率在隐性模型下与T2D(45.9%vs.47.4%, P= 0.027, OR=1.266,95%CI= 1.028-1.560),该性在对年龄、性别和BMI做了多因素回归校正后失去统计学(P= 0.054, OR=1.234, 95%CI= 0.996-1.528)。位点rs521674与T2D不。经过分组分析发现,SNP位点rs553668的等位基因频率在隐性模型下与BMI＜25 kg/m2的T2D性更为(18.8%vs.25.3%, P= 0.011, OR=1.464,95%CI= 1.091-1.963)。研究本研究结果提示所检测的FOXO1基因的SNPs对T2D的发病风险不存在作用；HNF4A基因rs11574736位点的CC基因型是T2D发生的抵抗因素,单倍型H7(C-G-T-A-C-C)、H8(C-G-T-A-T-G)也是T2D发生的抵抗因素；FOXOl基因和HNF4A基因之间存在一定的作用。ADRA2A基因的SNP位点rs553668与体重指数BMI＜25 kg/m2的T2D,提示ADRA2A可能在BMI＜25 kg/m2的T2D发生中起着的调控作用。关键词：2型糖尿病论文单核苷酸多态性论文FOXO1基因论文HNF4A基因论文ADRA2A基因论文基因-基因交互作用论文PCR-RFLP论文TaqMan技术论文
中文摘要4-7
英文摘要7-10
一、前言10-17
二、研究目的、对象及方法17-19
三、实验内容和技术路线19-20
四、研究方法20-30
五、统计学分析30-31
六、研究结果31-43
七、讨论43-52
小结52-53