本站原创摘要4-6
ABSTRACT6-13
章 绪论13-19
1.1 木聚糖13
1.2 木聚糖酶的概述13-14
1.2.1 木聚糖酶的分类13-14
1.2.2 木聚糖酶的分子结构14
1.3 真菌来源的的木聚糖酶基因的克隆和表达的研究进展14-15
1.4 木聚糖酶的应用15-16
1.4.1 在饲料行业的应用15-16
1.4.2 在造纸行业的应用16
1.4.3 在其他的应用16
1.5 木聚糖酶的基因工程和蛋白质工程研究进展16-17
1.6 毕赤酵母表达系统17
1.7 本研究的目的和17-19
章 瓶霉 G5 来源的木聚糖酶基因xyn10G5 和xyn11G5 的克19-39
2.1 实验19-20
2.1.1 菌株和质粒19
2.1.2 引物合成与核酸序列测序19
2.1.3 工具酶，试剂盒和生化试剂19
2.1.4 主要仪器19
2.1.5 培养基和常用溶液19-20
2.2 实验方法20-28
2.2.1 瓶霉Phialophora sp. G5 菌株基因组DNA 的提取20
2.2.2 木聚糖酶基因同源克隆及简并引物的设计20
2.2.3 木聚糖酶基因片段的20-21
2.2.4 木聚糖酶基因完整序列的21-25
2.2.5 木聚糖酶cDNA 的克隆25-28
2.3 结果与讨论28-38
2.3.1 简并引物的设计和同源克隆28-29
2.3.2 木聚糖酶基因全长序列的29-31
2.3.3 木聚糖酶基因cDNA 的克隆31-32
2.3.4 两个木聚糖酶基因序列的分析32-38
2.4 讨论与小结38-39
章 木聚糖酶基因xyn10G5和xyn11G5在毕赤酵母中的表达和纯39-52
3.1 实验39-40
3.1.1 质粒和菌株39
3.1.2 引物合成和核酸序列测定39
3.1.3 试剂盒，工具酶和化学试剂39
3.1.4 主要仪器39
3.1.5 培养基和溶液39-40
3.2 实验方法40-47
3.2.1 重组表达载体pPIC9- xyn10G5 和pPIC9- xyn10G5 的构建40-43
3.2.2 木聚糖酶基因xyn10G5 和xyn11G5 在毕赤酵母中的表达43-46
3.2.3 木聚糖酶活性的测定46
3.2.4 重组木聚糖酶XYN10G5 和XYN11G5 的纯化46-47
3.2.5 木聚糖酶XYN10G5 和XYN11G5 的质谱鉴定47
3.3 结果与讨论47-50
3.3.1 重组表达载体 pPIC9- xyn10G5 和 pPIC9- xyn10G5 的构建47-48
3.3.2 木聚糖酶基因 xyn10G5 和 xyn11G5 在毕赤酵母中的表达48
3.3.3 重组木聚糖酶XYN10G5 和XYN11G5 的纯化48-50
3.4 讨论与小结50-52
章 重组木聚糖酶 XYN10G5 和 XYN11G5 酶学性质的研究52-67
4.1 52
4.1.1 实验52
4.1.2 试剂盒、工具酶和生化试剂52
4.1.3 主要仪器52
4.1.4 主要溶液52
4.2 实验方法52-55
4.2.1 最适pH 与pH 稳定性的测定52-53
4.2.2 最适温度与热稳定性的测定53
4.2.3 不同金属离子及化学试剂对酶活力的影响53
4.2.4 抗蛋白酶能力的测定53
4.2.5 底物特异性的测定53-54
4.2.6 比活的测定54
4.2.7 重组酶的Km值、Vmax 和kcat的测定54
4.2.8 产物分析54
4.2.9 木聚糖酶XYN10G5 在模拟人工胃液条件下水解能力的测定54-55
4.2.10 木聚糖酶XYN10G5 在模拟人工胃液条件下对大麦豆粕型饲料粘度的影响55
4.3 结果与分析55-65
4.3.1 最适pH 与pH 稳定性的测定55-56
4.3.2 最适温度与热稳定性的测定56-57
4.3.3 不同金属离子及化学试剂对酶活力的影响57-60
4.3.4 重组酶的抗蛋白酶能力测定60-62
4.3.5 底物特异性的测定62-63
4.3.6 重组酶比活的测定63
4.3.7 重组酶的K_m值、V_(max) 和k_(cat)的测定63
4.3.8 产物分析63-64
4.3.9 木聚糖酶XYN10G5 在模拟人工胃液条件下水解能力的测定64
4.3.10 木聚糖酶XYN10G5 在模拟人工胃液条件下对大麦豆粕型饲料粘度的影响64-65
4.4 讨论与小结65-67
全文总结67-68