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线虫湖南省黄鳝体内胃瘤线虫感染调查与遗传特异性信

收藏本文 2024-01-27 点赞:6381 浏览:17165 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:黄鳝寄生虫病是危害黄鳝健康的一大类疾病。黄鳝中寄生线虫种类很多,胃瘤线虫幼虫为优势虫种,感染后不仅影响其生长发育,还使其更容易遭受其它病原的入侵,继发多种疾病,严重时甚至造成黄鳝的死亡。本探讨的第一部分首次对湖南省17个采样点共计928尾养殖类和野生类黄鳝体内胃瘤线虫感染情况进行了调查,结果表明岳阳采样点的野生类黄鳝胃瘤线虫的感染率最高(44.44%);马王堆采样点的养殖类黄鳝胃瘤线虫的感染率最低(4.46%)。湘潭采样点的野生类黄鳝胃瘤线虫的感染强度最大(6.20条/尾);永州采样点的野生类黄鳝胃瘤线虫的感染强度最小(1.00条/尾)。总体就两类样本而言,养殖类黄鳝的感染率为22.29%,感染强度为1.84条/尾;野生类黄鳝的感染率为22.34%,感染强度为1.97条/尾。该调查结果为更好地防治黄鳝胃瘤线虫病提供了重要的依据。本探讨的第二部分浅析了黄鳝胃瘤线虫线粒体细胞色素C氧化酶第一亚基(coxl)的基因片段。根据GenBankTM上已发表的胃瘤线虫相关基因序列设计一对引物,对coxl基因进行扩增、转化及测序。将得到的17条coxl基因部分序列片段(pcox1)经过互比较较及浅析,结果显示pcox1序列片段无长度差别、碱基变异率为10.7463%、种内差别为0-5.3%;碱基C含量最高,为(29.99±0.6343)%、碱基G含量最低,为(17.03±0.2468)%。此外,通过系统发生树浅析发现coxl基因序列能将胃瘤线虫及其他无尾感器纲线虫很好的区分开来,且采集的17个样品中很可能有着多个基因型。由此表明,coxl基因的保守性非常高,可以选择coxl作为遗传标记进行胃瘤线虫的分类鉴定。本探讨的第三部分浅析了黄鳝胃瘤线虫核糖体DNA(rRNA)内部转录间隔区(ITS)的序列。根据GenBankTM上已发表的胃瘤线虫相关基因序列设计一对引物,对ITS序列进行扩增、转化及测序。浅析发现获得的黄鳝胃瘤线虫ITS-1基因片段长度有着一定差别,为350-351bp; G+C含量为(44.39±0.5541)%;种内差别为0-7.2%;ITS-2基因片段长度亦有着一定差别,为340-344bp; G+C含量为(45.90±0.3971)%;种内差别为0-5.2%。通过对ITS全序列进行系统发生树的构建发现,湖南省采集的样品株与NCBI上搜索到的3株样品能显著的分为三大枝,且其能准确的与其他无尾感器纲线虫区分开来。而湖南省采集的样品均分布在其中的两大枝上。由此表明, ITS序列同样适合做为遗传标记对胃瘤线虫进行分类鉴定,且相比于cox1基因更为合适。本试验系国内首次针对湖南省多地黄鳝胃瘤线虫cox1、ITS序列进行遗传变异情况浅析,找到了有效的遗传标记用以探讨胃瘤线虫分子分类学、种群遗传学,并发现了黄鳝体内胃瘤线虫幼虫至少有着两种基因型,补充了国内黄鳝体内胃瘤线虫分子水平相关探讨的空白。关键词:黄鳝论文胃瘤线虫论文感染调查论文cox1论文ITS论文

    摘要4-6

    Abstract6-14

    第一章 文献综述14-32

    1 黄鳝养殖的重要量14-15

    1.1 黄鳝的分布14

    1.2 黄鳝的营养价值14

    1.3 黄鳝的药用价值14-15

    1.4 黄鳝的开发利用价值15

    1.5 黄鳝的自然资源近况及养殖前景15

    2 黄鳝的寄生虫病15-17

    2.1 寄生虫的种类15-16

    2.2 寄生虫对黄鳝的危害16-17

    3 黄鳝中寄生虫的探讨概况17-22

    3.1 国内关于黄鳝中寄生虫的探讨概况17-21

    3.1.1 棘头虫17-18

    3.1.2 鳗鲡独孤吸虫18-19

    3.1.3 胃瘤线虫19-20

    3.1.4 鳝锥体虫20

    3.1.5 黄鳝寄生虫的感染情况调查20-21

    3.2 国外关于黄鳝中寄生虫的探讨概况21-22

    4 胃瘤线虫探讨概况22-29

    4.1 国内关于胃瘤线虫的探讨概况22

    4.2 国外关于胃瘤线虫的探讨概况22-29

    4.2.1 胃瘤线虫的种类22

    4.2.2 胃瘤线虫的生活史22-23

    4.2.3 胃瘤线虫种间的感染差别23-24

    4.2.4 胃瘤线虫的分布24-26

    4.2.5 胃瘤线虫感染的季节性26

    4.2.6 胃瘤线虫的形态学26-29

    5 DNA序列在分类鉴定和系统发育中的运用29-31

    5.1 核糖体DNA序列29

    5.2 线粒体DNA序列29-31

    6 探讨内容与目的作用31-32

    6.1 探讨内容31

    6.2 目的作用31-32

    第二章 湖南省黄鳝胃瘤线虫感染情况调查32-38

    1 材料与策略32-34

    1.1 材料32-33

    1.1.1 样品来源32-33

    1.1.2 试剂33

    1.1.3 器材33

    1.2 策略33-34

    1.2.1 虫体采集33

    1.2.2 虫种鉴定33

    1.2.3 判定依据33-34

    2 试验结果34-37

    2.1 虫种鉴定34-36

    2.1.1 头部显微观察34-35

    2.1.2 尾部显微观察35-36

    2.2 湖南省黄鳝胃瘤线虫感染情况36-37

    3 讨论37-38

    第三章 黄鳝寄生的胃瘤线虫线粒体cox1基因多态性探讨38-49

    1 材料与策略38-44

    1.1 材料38-40

    1.1.1 虫体样品38-39

    1.1.2 仪器和试剂39

    1.1.2.1 主要仪器39

    1.1.2.2 试剂和酶39

    1.1.3 溶液和培养基的配制39-40

    1.1.3.1 溶液的配制39-40

    1.1.3.2 培养基的配制40

    1.1.3.3 感受态细胞的制备40

    1.2 策略40-44

    1.2.1 虫体总DNA的提取40-41

    1.2.1.1 虫体的处理40-41

    1.2.1.2 虫体DNA的提取41

    1.2.2 线粒体DNA cox1基因片段的PCR扩增41-44

    1.2.2.1 cox1基因片段的PCR扩增41-42

    1.2.2.2 PCR产物的纯化和连接42-43

    1.2.2.3 重组质粒转化及菌落PCR鉴定43-44

    1.2.3 DNA测序及浅析44

    2 结果与浅析44-48

    2.1 PCR扩增结果44-45

    2.2 DNA测序结果45

    2.3 DNA序列浅析结果45-48

    2.3.1 pcox1基因序列BLAST比对45

    2.3.2 pcox1基因序列碱基含量45-46

    2.3.3 pcox1基因序列种内相似性与差别性46

    2.3.4 pcox1基因序列系统发生树46-48

    3 讨论48-49

    第四章 黄鳝寄生的胃瘤线虫rDNA ITS基因的扩增及多态性浅析49-59

    1 材料与策略49-51

    1.1 材料49-50

    1.1.1 虫体样品49

    1.1.2 仪器和试剂49-50

    1.1.3 溶液和培养基的配制50

    1.2 策略50-51

    1.2.1 虫体总DNA的提取50

    1.2.2 核糖体DNA ITS片段的PCR扩增50-51

    1.2.2.1 ITS片段的PCR扩增50-51

    1.2.2.2 PCR产物的纯化和连接51

    1.2.2.3 重组质粒转化及菌落PCR鉴定51

    1.2.3 DNA序列浅析51

    2 结果与浅析51-58

    2.1 PCR扩增结果51-52

    2.2 DNA测序结果52

    2.3 DNA序列浅析结果52-58

    2.3.1 ITS基因序列BLAST比对52

    2.3.2 ITS基因序列碱基含量52-53

    2.3.3 ITS基因序列种内相似性与差别性53-54

    2.3.4 ITS基因序列系统发生树54-58

    3 讨论58-59

    第五章 结论与革新59-61

    1 结论59

    2 革新59-61

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