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试议水杨酸中度嗜盐菌Martelellasp.AD3菲降解酶特性

收藏本文 2024-02-24 点赞:24799 浏览:109191 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:水杨酸-5-羟化酶和双加氧酶在多环芳烃的好氧微生物降解历程中起着非常重要的作用,它们在非嗜盐菌属中探讨较多,而在耐盐及嗜盐菌属中的报道较少。其中,人们也较多关注水杨酸-5-羟化酶在单环和双环芳烃类化合物降解中的作用,在三环芳烃类化合物降解历程中的作用探讨较少。本论文探讨好氧、中度嗜盐菌Martelella sp.AD-3降解三环化合物—菲的历程中,降解菲的特性、降解酶的活性、水杨酸-5-羟化酶的最佳激活条件、以及双加氧酶基因的序列特点。Hplc浅析表明,AD-3菌在0.5%-15%的盐度下降解菲,最佳降解条件为盐度3%、pH9.0,6天内降解率达100%。酶活浅析表明,在降解菲的AD-3菌粗酶液中可以检测到1-羟基-2-萘甲酸羟化酶、1-萘酚羟化酶、水杨酸-5-羟化酶的活力,水杨酸-5-羟化酶达到最高酶活力的条件为菲浓度200mg/L、生长盐度3%、pH9.0,酶活力为132.8nmol/min/mg。利用半巢式PCR策略扩增得到双加氧酶基因phn592,与嗜盐菌株Marinobacter sp.NCE312萘-1,2-双加氧酶铁硫蛋白基因(nahAc)同源性为95%。本探讨表明,AD-3菌生长盐度宽泛,菲降解速率快;在降解菲历程中,水杨酸-5-羟化酶活力显著提升,其活性与菲降解速率有正相关性;AD-3菌与非嗜盐菌降解多环芳烃具有不同的分子机制,为进一步探讨中度嗜盐菌多环芳烃降解酶的特性提供了重要参考信息。关键词:多环芳烃论文菲论文Martelella论文sp.AD-3论文水杨酸-5-羟化酶论文双加氧酶论文

    摘要5-6

    Abstract6-10

    第1章 绪论10-25

    1.1 多环芳烃概述10-12

    1.1.1 多环芳烃的分类和结构10-11

    1.1.2 多环芳烃的性质11

    1.1.3 多环芳烃的污染情况11-12

    1.1.4 高盐环境的多环芳烃污染12

    1.2 菲的微生物降解12-15

    1.2.1 菲的性质12-13

    1.2.2 嗜盐菌对菲的降解13-14

    1.2.3 菲代谢的水杨酸途径14-15

    1.3 菲的降解酶系15-18

    1.3.1 细菌多环芳烃代谢途经中的酶系15

    1.3.2 1,2-二羟基茶双加氧酶15-16

    1.3.3 1-羟基-2-萘甲酸双加氧酶16

    1.3.4 1-萘酚-2-羟化酶16

    1.3.5 水杨酸-5-羟化酶16-17

    1.3.6 邻苯二酚双加氧酶17

    1.3.7 龙胆酸-1,2-双加氧酶17-18

    1.3.8 邻苯二甲酸双加氧酶18

    1.3.9 原儿茶酸双加氧酶18

    1.4 多环芳烃起始双加氧酶的基因18-23

    1.4.1 双加氧酶18-19

    1.4.2 双加氧酶基因19

    1.4.3 菲双加氧酶基因19-22

    1.4.4 扩增双加氧酶基因的引物序列22-23

    1.5 本论文的探讨目的和探讨作用23-25

    1.5.1 目前有着的不足23-24

    1.5.2 探讨目的与作用24

    1.5.3 技术路线24-25

    第2章 Martelella sp.AD-3对菲的降解特性25-34

    2.1 材料与策略25-27

    2.1.1 材料与试剂25-26

    2.1.2 试验策略26-27

    2.2 结果与讨论27-34

    2.2.1 AD-3的底物特异性27-29

    2.2.2 AD-3菌株不同生长盐度的菲降解率29-30

    2.2.3 AD-3菌株不同pH的菲降解率30-31

    2.2.4 生长曲线31-32

    2.2.5 菲降解曲线32-33

    2.2.6 小结33-34

    第3章 菲降解历程中关键酶的活性探讨34-43

    3.1 材料与策略35-38

    3.1.1 材料与试剂35

    3.1.2 试验策略35-38

    3.2 结果与讨论38-43

    3.2.1 菲对AD-3蛋白表达的影响38

    3.2.2 菲降解酶的活性浅析38-39

    3.2.3 酶反应的光谱浅析39-40

    3.2.4 水杨酸-5-羟参化酶的活性浅析40-41

    3.2.5 菲代谢途径的初步推断41-42

    3.2.6 小结42-43

    第4章 Martelella sp.AD-3降解菲历程中水杨酸-5-羟化酶的活性分浅析43-51

    4.1 材料与策略43-44

    4.1.1材料与试剂43

    4.1.2 试验策略43-44

    4.2 结果与讨论44-51

    4.2.1 不同生长时期水杨酸-5-羟化酶的活性浅析44-45

    4.2.2 不同诱导物对水杨酸-5-羟化酶活性的影响45-46

    4.2.3 不同浓度菲对水杨酸-5-羟化酶活性的影响46

    4.2.4 不同盐度对水杨酸-5-羟化酶活性的影响46-47

    4.2.5 不同温度对水杨酸-5-羟化酶活性的影响47-48

    4.2.6 不同pH对水杨酸-5-羟化酶活性的影响48

    4.2.7 盐度对酶活力的影响48-49

    4.2.8 水杨酸-5-羟化酶的酶促动力学参数浅析49-50

    4.2.9 小结50-51

    第5章 多环芳烃双加氧酶基因的克隆及序列浅析51-61

    5.1 材料与策略51-57

    5.1.1 材料与试剂51-52

    5.1.2 策略52-57

    5.2 结果与讨论57-61

    5.2.1 吲哚反应57

    5.2.2 phn307的PCR扩增结果57-58

    5.2.3 phn411的PCR扩增结果58-59

    5.2.4 序列浅析59-60

    5.2.5 系统发育树60

    5.2.6 小结60-61

    第6章 结论与展望61-62

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