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基因治疗AdING4O联合放疗对喉癌抑瘤增效体内外实验

收藏本文 2024-01-04 点赞:34946 浏览:158983 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:目的:探讨腺病毒载体介导的双基因共表达(Ad-ING4-O)联合放疗在体内外对喉癌抑瘤增效的协同作用及其分子机制。策略:将基因重组腺病毒载体感染QBI-293A细胞,经多轮感染后扩增以备用;利用不同剂量的携带有绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体(Ad-GFP)感染喉癌Hep-2细胞以确定最适感染剂量;Annexin-V-PE/7-AAD双染流式细胞术(FCM)检测放疗对喉癌Hep-2细胞的促凋亡作用以确定最适放疗剂量。在体外实验中,将Ad-ING4-O感染喉癌Hep-2细胞并联合放疗作用,运用RT-PCR及Westernblot检测ING4、O基因的转录及翻译;MTT法和Annexin-V-PE/7-AAD双染的FCM检测喉癌Hep-2细胞的生长抑制和凋亡效应;PI单染的FCM检测喉癌Hep-2细胞细胞周期的变化;Hoechst33258染色观察喉癌Hep-2细胞凋亡核形态学变化;半定量RT-PCR检测浅析喉癌Hep-2细胞的细胞周期和细胞凋亡相关基因P21、P27、P53、Survivin的表达。在体内实验中,建立喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤动物模型,分组处理,测量瘤体体积、重量并计算抑瘤率,评估Ad-ING4-O联合放疗对人喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的抑瘤增效作用;免疫组化检测细胞周期和凋亡相关蛋白及肿瘤血管形成相关因子P21、P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cox-2、CD34的表达以而浅析可能的相关分子机制。结果:感染QBI-293A细胞后,高效价的基因重组腺病毒载体被成功扩增;腺病毒载体感染喉癌Hep-2细胞的最佳剂量为100MOI(感染复数);联合放疗选用的最佳放射剂量为6Gy;RT-PCR和Western blot检测证实腺病毒介导的外源性ING4和O基因可以在喉癌Hep-2细胞中稳定转录及翻译,并且在其它各组中均未发现内源性的ING4和O基因。在体外实验中,Ad-ING4-O联合放疗能显著抑制喉癌Hep-2细胞的生长、推动其凋亡,其作用显著优于单纯放疗和Ad-ING4-O(P0.05),具有抑瘤增效的协同作用,并且能更加显著地引起G1期和G2/M期阻滞、上调P21、P27、P53并下调survivin等细胞周期和细胞凋亡相关基因的表达。在体内实验中,Ad-ING4-O联合放疗能更加显著抑制喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的生长,推动其凋亡,其作用显著优于单纯放疗和Ad-ING4-O(P0.05),具有抑瘤增效的协同作用;免疫组化检测结果表明:Ad-ING4-O联合放疗能更显著上调喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤内P21、P53、Bax、Caspase-3和下调Cox-2、Bcl-2等细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达并下调肿瘤血管形原因子CD34的表达,且Ad-ING4-O联合放疗作用显著优于单纯放疗和Ad-ING4-O,差别有统计学作用(P0.05)。结论:1、与单纯放疗和Ad-ING4-O相比,Ad-ING4-O联合放疗在体外能更加显著地抑制喉癌Hep-2细胞的生长,推动其凋亡,具有抑瘤增效的协同作用,其作用机制可能与引起G1期和G2/M期阻滞,上调P21、P27、P53并下调survivin等细胞周期和细胞凋亡相关基因表达的作用有关。2、与单纯放疗和Ad-ING4-O相比,Ad-ING4-O联合放疗在体内能更加显著地抑制喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的生长,具有抑瘤增效的协同作用,其作用机制可能与上调喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤内P21、P53、Bax、Caspase-3和下调Cox-2、Bcl-2等细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达并下调肿瘤血管形原因子CD34的表达有关。关键词:ING4论文O论文喉癌论文基因治疗论文放射治疗论文

    中文摘要5-7

    Abstract7-10

    前言10-13

    第一部分 Ad-ING4-O 联合放疗对喉癌抑瘤增效的体外实验探讨13-30

    1.材料与策略13-19

    2.结果19-25

    3 讨论25-30

    第二部分 Ad-ING4-O 联合放疗对喉癌抑瘤增效的体内实验探讨30-40

    1.材料与策略30-34

    2.结果34-37

    3.讨论37-40

    结论40-41

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