本站原创
1672－3783(2012)07－0300－01
【摘要】不同厂家生产的五分类血球仪在检测原理上不尽相同，在白细胞分类上更是使用了不同的检测方法和试剂，但从根本上讲，其检测原理大致分为电阻抗法与光散射法两部分。本文对红细胞计数原理、血小板计数原理、白细胞计数原理、白细胞分类原理、网织红细胞检测原理分别加以阐述。
【关键词】五分类血球仪；血细胞计数；白细胞分类
目前，具有白细胞五分类功能的血球仪已广泛应用于各级医院的临床检验科，我们常见的国外品牌有Beckman-Coulter、ABX、Syex、Bayer、日本光电；在国内已经有迈瑞(MINDRAY)公司生产几个型号的五分类血球仪投入医疗市场。虽然现代不同品牌五分类血球仪的计数及分类方法不尽相同，有些还采用了与流式细胞仪相同的先进技术［1］，但从根本上讲，其检测原理大致分为两部分，即电阻抗法与光散射法［2］，本文重点就五分类血球仪对血样标本中各类细胞的计数及分类方法加以阐述。
1.2 血红蛋白浓度(HGB)测定：采用溶血比色法。血标本在溶血剂的作用下，红细胞破坏，溶血素与血红蛋白结合成稳定的氰化血红蛋白，在特定波长下比色，吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成正比，溶血液在流经比色池时仪器根据吸光度计算出HGB的含量［3］。
1.3 平均红细胞体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)是根据RBC、HCT、HGB计算而得。
2 血小板计数原理
2.1 电阻抗法：血小板测定与红细胞计数原理一致，仪器将直径2～30 fl的颗粒统计为血小板，大于36 fl的颗粒统计为红细胞［4］。
2.2 光学法：根据Mie理论，当球形化的血小板单个通过激光照射区时，仪器在两个角度测定激光的散射强度；高角度主要测细胞的折射指数(RI)，它与细胞的密度有关；低角度主要测细胞体积的大小。血小板的体积在1～30fl， RI在1.35～1.40。微机对存储的测量信息进行分析处理，得出血小板计数结果。
3.2 光学法：血标本在稀释液和溶血剂的作用下制成一定浓度的白细胞悬液，根据流体力学的鞘流技术原理，使得白细胞一一流经仪器检测器，每个细胞在通过检测器时都会受到一束固定波长的激光照射，微机根据光的折射、反射、前向角等信号识别和计数细胞［5］。
4.2 体积、电导、光散三射法：血标本在特殊的稀释液和溶血剂作用下红细胞被破坏，但白细胞形态和结构仍保持自然状态。当白细胞在鞘流的引导经检测器时，会同时受到V、C、S3种技术的检测。V是利用电阻抗法测定细胞体积；C是利用高频电磁波，根据各种细胞核浆的电导性不同测理细胞内部结构、核浆比例；S是利用光散射原理测量细胞内颗粒的大小密度等结构特性。计算机根据3种技术得到的资
4.3 多角度消偏振激光散射法：血标本在特殊鞘液的作用下，红细胞内血红蛋白游离出细胞外，红细胞变得透明，而白细胞的内部结构和膜结构基本保持自然状态。当细胞悬液的鞘流经过检测器时，仪器从4个不同的角度得到每个细胞的光信号，这4个角度分别为0°前向角光散射测定细胞的大小；7°～10°狭角光散射测定细胞内部结构及其复杂特征； 90°垂直光散射测定细胞内部颗粒和胞浆成分；90°消偏振光散射利用嗜酸性细胞内颗粒特有的消偏振特性，将嗜酸性细胞直接分离。计算机综合4个角度的光信号，将白细胞分类，并提供提示信息和相关图谱。
4.4 电阻抗与射频技术分类法：通过4个不同的检测系统完成白细胞的分类:嗜酸性细胞、嗜碱性细胞利用特有的抗酸和抗碱能力，在各自特殊试剂的作用下，进入独立通道直接计数；在直流电和交流电的同时作用下，仪器根据细胞大小以及细胞内部的核结构、核浆比例、胞浆颗粒等信息区分中性、淋巴、单核细胞；幼稚细胞由于其膜上脂质成分比成熟细胞少，在硫化氨基酸的保护下具有一定的抗溶血能力，有独立的通道内直接计数。
4.5 光散射与细胞过氧化物酶染色法：血标本进入仪器，在一系列的预处理液和白细胞过氧化物酶染色后流经检测器。每个细胞在激光束的照射下，各类细胞因过氧化物酶含量不同，具有不同的光吸收信号；根据每个细胞的前向角大小可以得到细胞的体积数据，同时仪器有单独的嗜碱性细胞直接计数通道，计算机根据这些信息得出细胞分类结果［7］。
5 网织红细胞检测原理
5.1 反射光测定法：网织红细胞经亚甲蓝染色后，胞浆内的RNA与染料结合形成蓝色颗粒。此颗粒在激光的照射下会产生特殊的反射光，而成熟红细胞没有特性。仪器根据反射光信号可以计算网织红细胞的百分比(Ret%)、绝比值(Ret#)、网织红细胞成熟指数(RMI)等相关指标。
5.2 发射光测定法：网织红细胞的RNA与吖啶橙、碱性槐黄等荧光染料结合后在一定波长的激光照射下发出固定波长的荧光。仪器根据发光细胞的数量和光强度信号以及红细胞测定的相关参数可以得到网织红细胞绝对值、高荧光强度网织红细胞(HFR)百分比、中荧光强度网织红细胞(MFR)百分比、低荧光强度网织红细胞(LFR)百分比、网织红细胞平均体积(MCVr)、网织红细胞分布宽度(RDWr)、网织红细胞蛋白分布宽度(HDWr)、网织红细胞浓度(HCr)、网织红细胞平均血红蛋白浓度(MCHCr)等参数［8］。
参考文献
［1］ 张旭凯，陆海峰?五分类血液细胞分析仪的原理及应用［J］.中国医疗器械信息，2006，12 (10): 52-56.
［2］ 王侃. 浅析五分类血球仪的计数及分类原理［J］ 医疗装备,2010,23(1):47-48.
［3］ 王琳,张正良. 散射光法检测血红蛋白量的可靠性［J］ 实用医技杂志,2010,17(4):299-300.
［4］ 乔蕊,李蕾, 张捷, 全血电阻法血小板聚集试验监测抗血小板治疗的应用评价［J］. 实用医学杂志,2011,27(16):3050-3052.
［5］ 乐家新，周建山，兰亚婷?血细胞分析仪检测原理［J］中华检验医学杂志， 2004， 27 (3): 205-208.
［6］杨律. STKS血细胞分析仪对白细胞分类结果的评价［J］ 现代中西医结合杂志,2008,17(1):97,151.
［7］ 肖振霞，焦连亭， 徐士欣. 红细胞内血红蛋白浓度平均值在鉴别脂浊对血红蛋白浓度测定影响的探讨［J］ 检验医学,2005,20(5):444,447.
［8］ 解玉琴 .42例网织血小板的检测结果分析［J］中国现代药物应用,2009,3(8):71.
【摘要】不同厂家生产的五分类血球仪在检测原理上不尽相同，在白细胞分类上更是使用了不同的检测方法和试剂，但从根本上讲，其检测原理大致分为电阻抗法与光散射法两部分。本文对红细胞计数原理、血小板计数原理、白细胞计数原理、白细胞分类原理、网织红细胞检测原理分别加以阐述。
【关键词】五分类血球仪；血细胞计数；白细胞分类
目前，具有白细胞五分类功能的血球仪已广泛应用于各级医院的临床检验科，我们常见的国外品牌有Beckman-Coulter、ABX、Syex、Bayer、日本光电；在国内已经有迈瑞(MINDRAY)公司生产几个型号的五分类血球仪投入医疗市场。虽然现代不同品牌五分类血球仪的计数及分类方法不尽相同，有些还采用了与流式细胞仪相同的先进技术［1］，但从根本上讲，其检测原理大致分为两部分，即电阻抗法与光散射法［2］，本文重点就五分类血球仪对血样标本中各类细胞的计数及分类方法加以阐述。
1 红细胞检测原理
1.1 红细胞计数(RBC)、血细胞比容(HCT)、红细胞分布宽度(RDW)一般采用电阻抗法。1.2 血红蛋白浓度(HGB)测定：采用溶血比色法。血标本在溶血剂的作用下，红细胞破坏，溶血素与血红蛋白结合成稳定的氰化血红蛋白，在特定波长下比色，吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成正比，溶血液在流经比色池时仪器根据吸光度计算出HGB的含量［3］。
1.3 平均红细胞体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)是根据RBC、HCT、HGB计算而得。
2 血小板计数原理
2.1 电阻抗法：血小板测定与红细胞计数原理一致，仪器将直径2～30 fl的颗粒统计为血小板，大于36 fl的颗粒统计为红细胞［4］。
2.2 光学法：根据Mie理论，当球形化的血小板单个通过激光照射区时，仪器在两个角度测定激光的散射强度；高角度主要测细胞的折射指数(RI)，它与细胞的密度有关；低角度主要测细胞体积的大小。血小板的体积在1～30fl， RI在1.35～1.40。微机对存储的测量信息进行分析处理，得出血小板计数结果。
3 白细胞计数原理
3.1 电阻抗法：血细胞是一种不良导体，将血液标本稀释、溶血后制成白细胞悬液，在负压的作用下，悬液流经一个带有微孔的恒压电路时，每个细胞会产生一个电阻脉冲信号，这些信号经过微机的放大、甄别、整形等处理，最后计算出单位体积内的白细胞数。3.2 光学法：血标本在稀释液和溶血剂的作用下制成一定浓度的白细胞悬液，根据流体力学的鞘流技术原理，使得白细胞一一流经仪器检测器，每个细胞在通过检测器时都会受到一束固定波长的激光照射，微机根据光的折射、反射、前向角等信号识别和计数细胞［5］。
4 白细胞分类原理
4.1 单一电阻法：在溶血素的作用下，白细胞发生皱缩，仪器根据白细胞颗粒产生的电阻脉冲信号的数量计算出单位容积内白细胞总数；再根据脉冲信号的强弱计算出细胞体积。经微机处理检测数据后，得到以体积为横坐标、以相对数量为纵坐标的白细胞分布二维直方图。将白细胞分为小细胞群(以淋巴细胞为主)、中间类型细胞群(以单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、部分幼稚细胞为主)和大细胞群(以成熟中性粒细胞为主)。4.2 体积、电导、光散三射法：血标本在特殊的稀释液和溶血剂作用下红细胞被破坏，但白细胞形态和结构仍保持自然状态。当白细胞在鞘流的引导经检测器时，会同时受到V、C、S3种技术的检测。V是利用电阻抗法测定细胞体积；C是利用高频电磁波，根据各种细胞核浆的电导性不同测理细胞内部结构、核浆比例；S是利用光散射原理测量细胞内颗粒的大小密度等结构特性。计算机根据3种技术得到的资
源于：论文查抄袭率怎么发表www.udooo.com
料综合分析，将中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞一一分开，以白细胞分类散点图显示这些细胞，并提示异常淋巴细胞、幼稚细胞、有核细胞、抗溶血红细胞等信息［6］。4.3 多角度消偏振激光散射法：血标本在特殊鞘液的作用下，红细胞内血红蛋白游离出细胞外，红细胞变得透明，而白细胞的内部结构和膜结构基本保持自然状态。当细胞悬液的鞘流经过检测器时，仪器从4个不同的角度得到每个细胞的光信号，这4个角度分别为0°前向角光散射测定细胞的大小；7°～10°狭角光散射测定细胞内部结构及其复杂特征； 90°垂直光散射测定细胞内部颗粒和胞浆成分；90°消偏振光散射利用嗜酸性细胞内颗粒特有的消偏振特性，将嗜酸性细胞直接分离。计算机综合4个角度的光信号，将白细胞分类，并提供提示信息和相关图谱。
4.4 电阻抗与射频技术分类法：通过4个不同的检测系统完成白细胞的分类:嗜酸性细胞、嗜碱性细胞利用特有的抗酸和抗碱能力，在各自特殊试剂的作用下，进入独立通道直接计数；在直流电和交流电的同时作用下，仪器根据细胞大小以及细胞内部的核结构、核浆比例、胞浆颗粒等信息区分中性、淋巴、单核细胞；幼稚细胞由于其膜上脂质成分比成熟细胞少，在硫化氨基酸的保护下具有一定的抗溶血能力，有独立的通道内直接计数。
4.5 光散射与细胞过氧化物酶染色法：血标本进入仪器，在一系列的预处理液和白细胞过氧化物酶染色后流经检测器。每个细胞在激光束的照射下，各类细胞因过氧化物酶含量不同，具有不同的光吸收信号；根据每个细胞的前向角大小可以得到细胞的体积数据，同时仪器有单独的嗜碱性细胞直接计数通道，计算机根据这些信息得出细胞分类结果［7］。
5 网织红细胞检测原理
5.1 反射光测定法：网织红细胞经亚甲蓝染色后，胞浆内的RNA与染料结合形成蓝色颗粒。此颗粒在激光的照射下会产生特殊的反射光，而成熟红细胞没有特性。仪器根据反射光信号可以计算网织红细胞的百分比(Ret%)、绝比值(Ret#)、网织红细胞成熟指数(RMI)等相关指标。
5.2 发射光测定法：网织红细胞的RNA与吖啶橙、碱性槐黄等荧光染料结合后在一定波长的激光照射下发出固定波长的荧光。仪器根据发光细胞的数量和光强度信号以及红细胞测定的相关参数可以得到网织红细胞绝对值、高荧光强度网织红细胞(HFR)百分比、中荧光强度网织红细胞(MFR)百分比、低荧光强度网织红细胞(LFR)百分比、网织红细胞平均体积(MCVr)、网织红细胞分布宽度(RDWr)、网织红细胞蛋白分布宽度(HDWr)、网织红细胞浓度(HCr)、网织红细胞平均血红蛋白浓度(MCHCr)等参数［8］。
参考文献
［1］ 张旭凯，陆海峰?五分类血液细胞分析仪的原理及应用［J］.中国医疗器械信息，2006，12 (10): 52-56.
［2］ 王侃. 浅析五分类血球仪的计数及分类原理［J］ 医疗装备,2010,23(1):47-48.
［3］ 王琳,张正良. 散射光法检测血红蛋白量的可靠性［J］ 实用医技杂志,2010,17(4):299-300.
［4］ 乔蕊,李蕾, 张捷, 全血电阻法血小板聚集试验监测抗血小板治疗的应用评价［J］. 实用医学杂志,2011,27(16):3050-3052.
［5］ 乐家新，周建山，兰亚婷?血细胞分析仪检测原理［J］中华检验医学杂志， 2004， 27 (3): 205-208.
［6］杨律. STKS血细胞分析仪对白细胞分类结果的评价［J］ 现代中西医结合杂志,2008,17(1):97,151.
［7］ 肖振霞，焦连亭， 徐士欣. 红细胞内血红蛋白浓度平均值在鉴别脂浊对血红蛋白浓度测定影响的探讨［J］ 检验医学,2005,20(5):444,447.
［8］ 解玉琴 .42例网织血小板的检测结果分析［J］中国现代药物应用,2009,3(8):71.