本站原创摘要5-6
Abstract6-11
第一部分 文献综述11-24
1.1 莱茵衣藻的探讨概况11-14
1.1.1 莱茵衣藻的分类地位及其细胞结构11
1.1.2 莱茵衣藻的生活史11-12
1.1.3 莱茵衣藻是一种很重要的方式生物12-13
1.1.3.1 莱茵衣藻作为探讨叶绿体及光合作用的材料12
1.1.3.2 莱茵衣藻作为探讨鞭毛和基体的材料12-13
1.1.4 莱茵衣藻外源基因的转化策略13-14
1.1.4.1 基因法13
1.1.4.2 玻璃珠法13
1.1.4.3 电击法13-14
1.2 基因功能探讨策略概况14-18
1.2.1 基因转导技术14
1.2.2 反义技术14-15
1.2.3 基因敲除(Gene knockout)与敲入(Gene knockin)15
1.2.4 RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)15-18
1.2.4.1 MicroRNA的形成及作用机制16-17
1.2.4.2 siRNA与miRNA的比较17-18
1.2.4.3 植物miRNA的生物学功能18
1.3 生物柴油的探讨概况18-20
1.3.1 生物柴油概况18-19
1.3.2 微藻产油的行业近况19-20
1.3.2.1 微藻产油的优点19-20
1.3.2.2 微藻产油面对的不足20
1.4 莱茵衣藻淀粉代谢途径与油脂合成联系的探讨概况20-22
1.5 本论文的探讨目的和作用22-24
第二部分 材料与策略24-37
2.1 实验材料24-28
2.1.1 供试菌株24
2.1.2 供试质粒24-25
2.1.3 植物材料25
2.1.4 培养基25-26
2.1.5 酶、试剂和材料26
2.1.6 仪器和设备26-27
2.1.7 主要缓冲液和抗生素的配制27
2.1.8 引物27-28
2.2 实验策略28-37
2.2.1 普通PCR扩增28-29
2.2.2 DNA胶回收29
2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备(TB法)29-30
2.2.4 大肠杆菌的常规转化30
2.2.5 大肠杆菌的快速转化30
2.2.6 质粒DNA的抽提及纯化(碱裂解法)30-31
2.2.7 细菌接合转移(MAGIC)实验31-32
2.2.8 莱茵衣藻的培养32
2.2.9 莱茵衣藻的遗传转化(玻璃珠震荡法)32-33
2.2.10 衣藻总DNA的提取33
2.2.11 衣藻总RNA的提取(Trizol试剂法)33-34
2.2.12 cDNA第一条链的反转录合成34
2.2.13 荧光实时定量PCR34-35
2.2.14 尼罗红染色荧光分光光度法快速检测莱茵衣藻中性脂相对含量35
2.2.15 淀粉试剂盒检测莱茵衣藻中淀粉含量35-37
第三部分 结果与浅析37-46
3.1 amiRNA表达载体的构建37-40
3.1.1 供体载体pRTK-STA6、pRTK-SSS2和pRTK-AMYB1的构建37-39
3.1.2 表达载体的构建39-40
3.2 转基因藻株的获得40-41
3.2.1 莱茵衣藻的遗传转化40-41
3.2.2 莱茵衣藻转化子的鉴定41
3.3 转基因藻的干扰效果浅析41-43
3.4 尼罗红染色法定量测定中性脂含量43-44
3.5 转基因藻中的淀粉含量的测定44-46
第四部分 讨论与展望46-48
4.1 讨论46-47
4.1.1 MicroRNA在转基因藻中的干扰效果46
4.1.2 STA6,SSS2基因沉默对莱茵衣藻淀粉含量及油脂积累的影响46
4.1.3 AMYB1基因沉默对莱茵衣藻淀粉含量及油脂积累的影响46-47
4.2 展望47-48
附录：重组质粒干扰单元及终止子序列测序结果48-50