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摘要：探讨背景：种植材料应具有良好的生物相容性、稳定的理化性能且便于加工。目前运用的种植体材料多数是钛种植体,不少学者通过离子喷涂及钛表面酸蚀技术或其理化策略(如激光蚀刻)转变种植体表面的形态特点,表而成分及增大接触面积来提升种植体骨接触率,以实现良好的初期稳定性。然而,种植义齿要获得长期稳定的骨整合及良好的美学效果,软组织整合也是其重要保障。目前越来越多的学者把种植体的探讨热点转移到软组织整合及软组织美学效果上通常认为种植体在植入后能获得良好的初期稳定性的前提下,愈合3个月后,新骨的形成矿化较少,可达到骨形成和改建的稳定性。新骨的矿化沉积率可以通过双色荧光标记法进行测定。种植体周围牙龈及粘膜软组织可直接附着在种植体或基台的表面,形成种植体软组织袖口。多数种植体由光滑颈部及粗糙体部组成。由此种植体软组织袖口直接与光滑表面接触。临床常常由于多种理由导致种植体周围骨吸收,软组织退缩致使软组织袖口直接附着在粗糙表面,如种植体周围炎切除性治疗后软组织退缩、临床种植体植入深度过浅或种植体过度负荷造成骨组织吸收,导致软组织退缩,使种植体软组织接附着在粗糙的表面。临床发现早期的Branemark种植体在软组织袖口退缩后直接附着在机械表面,长期利用后,仍然能维持稳定。种植体软组织袖口如果退缩至粗糙的种植体表面,能否像光滑表面一样获得长期的稳定性,是本实验探讨的目的。健康的种植体软组织袖口有利于形成良好的生物学封闭,抵御外来细菌及微生物的侵袭。不同文献对软组织袖口的探讨尚未形成统一定论。有学者认为粗糙的种植表面有利于上皮细胞的生长及延伸,而光滑的种植体表面则细胞的形态较平坦,平铺生长方向。紧密的上皮结合有利于生物学封闭的维持。粗糙的表面也有利于增加种植体骨接触面积,同光滑表面相比,能有效的增加种植体的稳定性。本课题旨在通过对不同表面种植体在愈合3个月后,临床探诊指标、新骨矿化沉积率以及组织学的观察,比较不同表面种植体软组织袖口的组织学特性。目的1.4只Beagle犬,拔除下颌双侧各4颗前磨牙延期植入不同表面处理方式的种植体,建立实验动物模型。通过3个月的愈合阶段,比较种植体植入后1个月、2个月、3个月时的临床探诊指标。2.实验动物在处死前不同时间进行双色荧光标记法,测量荧光条带之间的距离,比较不同表面处理方式在种植体植入后3个月后新骨矿化沉积的速率3.实验动物处死后,制取下颌骨带种植体标本,进行Micro-CT扫描,浅析测量种植体螺纹间成骨效应,比较不同种植体表面处理方式在愈合3个月后骨参数的差别性。4.制取标本后,通过塑料包埋技术,制作带种植体骨磨片,显微镜下观察不同表面处理方式种植体软组织袖口的组织学特性。策略1.实验动物选择健康成年雄性Beagle犬4只,犬龄12-14个月,体重14.7～18.0kg。Beagle犬的齿式为2(I3/3,C1/1,Pm4/4,M2/3),全口共42颗牙。所选实验动物生化指标正常,精神正常,无急性炎症,无传染性疾病,无慢性牙周病及龋病,咬合联系正常。饲养于中山大学动物实验中心,独立分笼圈养,定时定量饮食。2.实验设计种植体设计与分组：由韩国奥齿泰种植公司惠赠,按照SSⅡ种植系统直径4.1mm,,长度10mm规格制作,要求制作表面不同处理方式及粗糙程度的种植体,体部和颈部均为同一种表面处理方式。根据不同表面处理方式分为4组,分别为MM组,RBM组,SA组和Bio-SA组。4只Beagle犬拔牙后愈合3个月,测量缺牙区间的距离。设计每只Beagle犬每侧植入5颗种植体,共40颗。每组表面处理种植体各10颗,采取随机数字表法,编号植入。3.动物模型的建立4只Beagle犬适应一周后,即准备进行实验。术前12h禁饮食,术前2h肌肉注射青霉素40万u/d,速眠新和钠复合麻醉下,微创拔除下颌双侧各4颗前磨牙。术后3d肌肉注射青霉素80万u/d,拍摄CT,定期观察拔牙创愈合情况。待拔牙创愈合3个月后,自牙槽嵴顶切开,翻开粘膜瓣,下颌双侧各植入5颗种植体。上愈合帽,术后3d肌肉注射青霉素80万u/d。种植体植入手术由一经验丰富的种植专家完成。愈合3个月后处死实验动物。4.临床指标测量种植体植入后1w,观察种植术区愈合情况。种植体周围无感染,无松动脱落。分别于术后1个月、2个月、3个月进行临床探诊检查。检查种植体松动度、叩诊声音、测量菌斑指数(PI)、牙龈指数(GI)、龈沟出血指数(SBI)、探诊出血(BOP)及牙周探诊深度(PD)。5. Micro-CT (?)旨标测量制取下颌骨标本后,先于10%液固定4d,然后转移在70%酒精中浸泡。扫描时先用塑料保鲜膜包裹整个标本,避开标本干燥,影响组织学的观察结果。扫描完成后继续浸泡在70%酒精中。6.荧光标记测量4只Beagle犬在处死前13、14d按30mg/kg颈部皮射10mg/ml四环素,处死前3d、4d按10mg/kg颈部皮射10mg/ml钙黄绿素,固定标本,进行丙烯酸甲酯包埋,利用Leica1600硬组织切片机切片,制作手工磨片,荧光显微镜下观察两种颜色条带,并多次测量取条带间的平均距离进行比较。7.组织学观察制取标本后,10%液固定,梯度酒精逐级脱水,包埋液浸泡,升温聚合,完成最终包埋,Leica1600切片厚,手工磨片,荡洗,亚蓝-酸性品红染色,封片,移至光学显微镜下观察。8.统计学浅析运用SPSS13.0软件进行统计学浅析。术后1-3个月4组PD的变化比较采取单个重复测量因素的方差浅析；四种表面种植体骨浅析指标BVF、Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp比较、荧光于螺纹内及远离螺纹区域时四组间测量值的比较以及组织观察长度比较采取单向方差浅析(One-Way ANOVA);术后1-3个月,4组探诊比较采取多个独立样本非参数检验(K Independent Samples Test)中的多组等级／频数表资料的比较进行统计；四组种植体荧光测量于螺纹间和远离螺纹的比较采取配对t检验(Paired-Samples T Test)。检验水准为α=0.05。结果1.大体观察：各组动物均无死亡,术后饮食、活动规律正常,创口愈合良好,粘膜无红肿、渗出,种植体及愈合帽无松动、脱落,存留率100%。4只Beagle犬拔牙后延期种植的动物模型成功建立。2.探诊指标测量经过术后1个月、2个月、3个月临床探诊指标观察,统计学浅析比较。术后1个月、2个月、3个月时4组PD的变化比较无显著性差别；术后1个月时4组探诊比较BOP、GI之间无显著性差别,认为4组探诊出血及牙龈指数相当。PI和SBI均有统计学作用,认为MM菌斑沉积最少,其次为Bio-SA、SA、 RBM。SBI指数MM组最低,其次为Bio-SA、RBM组和SA；术后2个月4组PI指数和GI指数无统计学作用。BOP和SBI四组比较有作用,认为SBI指数和BOP均为MM组最低,其次为Bio-SA、SA和RBM组；术后3个月探诊4组各项指标比较均无显著性差别,认为3个月后,4种表面处理的种植体软组织袖口健康指数相当。3. Micro-CT测量结果制取好的标本,通过Micro-CT扫描进行骨浅析,通过测量BVF、Tb.N、 Tb.Sp、Tb.Th来进行骨浅析,通过统计学浅析,比较结果显示RBM组与SA组之间无显著性差别,余两两比较均有着显著差别。其中Bio-SA组相对骨体积分数、骨小梁数量及骨小梁厚度最高,而MM组最低,骨小梁分离度MM组最高,Bio-SA反之。4.双色荧光标记法测量结果处死实验动物后,通过荧光显微镜观察到双色荧光标记带。靠近种植体侧为橙荧光条带,远离种植体侧为亮绿色荧光条带。测量两条条带之间的距离／两次给药间隔时间,即可计算出新骨矿化沉积的速率。经过统计学计算,螺纹内荧光四组间测量值的比较各组之间无显著性差别；比较四组种植体螺纹间和远离螺纹区域,结果显示MM组和Bio-SA组荧光测量在螺纹间和远离螺纹之间有着显著性差别,而RBM组和SA组的荧光测量在螺纹间和远离螺纹之间无显著性差别。5.组织学比较通过塑料包埋制作骨磨片标本,经亚蓝-酸性品红染色后,可以成功的观察种植体周围软硬组织的变化情况。其中软组织被染成蓝色、骨组织被染色成红色。通过比较种植体软组织袖口的组织学变化,发现不同软组织袖口在上皮细胞的排列、附着及胶原纤维的生长方向比较上,未见显著性差别,均沿着种植体颈部向根部延伸生长。但是通过统计学比较种植体龈缘到种植体间的水平距离,光滑颈部及粗糙颈部之间具有统计学作用。显示粗糙的种植体表而结合上皮贴合的更加紧密,更有利于生物学封闭的形成。结论1. Beagle犬的牙槽骨形态、骨质密度与人接近,且容易饲养、生命力顽强,性格温顺,经济,是口腔动物实验的首选。通过Beagle犬拔牙后采取延期植入种植体的策略,能成功的建立种植体骨整合的实验动物模型。2.4只Beagle犬种植术后精神情况良好,探诊结果认为4种不同表面的种植体的PD没有统计学作用,PI、GI、SBI (?)旨数有些许差别,但均在正常范围之内,认为4种不同表面的种植体均能维持健康的软组织状态,3个月后均可获得软组织的稳定性。3. Micro-CT测量浅析3个月后新骨的生成情况,认为Bio-SA组具有最多的骨小梁数量及骨体积分数,而MM组骨小梁数量最少。4.荧光测量及浅析：比较不同表面处理方式新生骨矿化沉积率,显示3个月后,MM组及Bio-SA组种植体螺纹内仍然有着新骨生成,而远离螺纹区域新骨生成较少。认为MM组和Bio-SA组种植体在3个月后种植体周围新骨矿化相对较多。5.组织形态学观察：通过制作带种植体软硬组织磨片,比较不同表面处理方式的种植体软组袖口,认为结合上皮的生长、结缔组织及胶原纤维的方向没有显著性差别,显示,粗糙表面的软组织袖口血管生成较多、纤维含量相对较少,光滑表面反之。关键词：种植论文软组织论文表面处理论文荧光标记论文Micro-CT论文动物模型论文组织学论文
摘要3-9
ABSTRACT9-19
前言19-23
第一章 Beagle犬拔牙后延期种植动物模型的建立23-33
1.1 引言23
1.2 材料和策略23-30
1.3 结果30
1.4 讨论30-31
1.5 小结31-33
第二章 临床探诊指标和Micro-CT的检测33-47
2.1 引言33
2.2 材料与策略33-36
2.3 结果36-43
2.4 讨论43-45
2.5 小结45-47
第三章 荧光标记测量及组织学观察47-69
3.1 引言47-48
3.2 材料与策略48-53
3.3 结果53-61
3.4 讨论61-68
3.5 小结68-69
全文总结69-70