本站原创摘要5-7
ABSTRACT7-13
第一章 绪论13-36
1.1 基因治疗13-26
1.1.1 基因治疗的概念13
1.1.2 基因治疗的进展及探讨近况13-15
1.1.3 基因治疗的策略和步骤15-16
1.1.4 基因传递历程16-22
1.1.4.1 基因传递历程的障碍16-20
1.1.4.2 基因传递历程复合物跨越障碍的可能的策略和途径20-22
1.1.5 基因治疗的运用22-23
1.1.5.1 基因治疗在肿瘤疾病中的运用22
1.1.5.2 基因治疗在组织工程中的运用22-23
1.1.6 基因治疗中待解决的关键不足23
1.1.7 基因治疗载体的种类及理想载体的特点23-26
1.1.7.1 病毒载体23-24
1.1.7.2 非病毒载体24-26
1.2 阳离子聚合物载体PAMAM26-31
1.2.1 PAMAM的探讨背景26-28
1.2.2 PAMAM的性质及在生物医药领域的运用28-30
1.2.3 PAMAM作为基因载体的探讨近况30-31
1.3 聚酰胺-胺型树状大分子包裹的纳米金颗粒(Dendrimer-Entrapped GoldNanoparticles,Au DENPs)31-32
1.4 疏水化修饰载体探讨进展32-33
1.5 叶酸靶向的基因治疗33-35
1.6 本论文的探讨作用与目标35-36
第二章 烷基化PAMAM树状大分子的修饰及复合物的制备与表征36-47
2.1 引言36-37
2.2 实验材料和策略37-42
2.2.1 实验试剂和设备37
2.2.2 烷基化PAMAM树状大分子的合成37-38
2.2.3 烷基化PAMAM树状大分子的表征38
2.2.3.1 ~1H NMR表征38
2.2.3.2 末端氨基定量38
2.2.4 质粒抽提与标记38-41
2.2.5 G5.NH_2-Cn/pDNA复合物的制备与表征41-42
2.2.5.1 G5.NH_2-Cn/pDNA复合物的制备41
2.2.5.2 凝胶阻滞试验41-42
2.2.5.3 粒径与Zeta电势的测定42
2.3 实验结果与讨论42-46
2.3.1 ~1H NMR表征42
2.3.2 末端氨基定量42-43
2.3.3 质粒抽提与标记43
2.3.4 凝胶阻滞试验43-44
2.3.5 粒径与Zeta电势44-46
2.4 小结46-47
第三章 烷基化PAMAM树状大分子的细胞毒性以及转染效率的探讨47-55
3.1 引言47
3.2 实验试剂和仪器设备47-48
3.3 实验策略48-49
3.3.1 MTT细胞毒性实验48
3.3.2 细胞转染实验48-49
3.3.2.1 荧光素酶表达实验48-49
3.3.2.2 绿色荧光蛋白表达实验49
3.3.3 细胞内吞实验49
3.4 实验结果与讨论49-54
3.4.1 细胞毒性49-50
3.4.2 细胞转染效率评价50-52
3.4.2.1 荧光素酶表达实验50-51
3.4.2.2 绿色荧光蛋白表达实验51-52
3.4.3 细胞内吞实验52-54
3.5. 小结54-55
第四章 包裹纳米金颗粒的叶酸功能化聚酰胺-胺树状大分子(Au DENPs-FA)的制备及Au DENPs-FA/DNA复合物的制备与表征55-65
4.1 引言55-56
4.2 实验材料和策略56-59
4.2.1 实验试剂和设备56-57
4.2.2 Au DENPs与AuDENPs-FA的合成57
4.2.3 Au DENPs-FA与Au DENPs的表征57-58
4.2.3.1 UV-Vis和1H NMR表征57-58
4.2.3.2 末端氨基定量58
4.2.3.3 透射电子显微镜(Tranission Electron Microscope,TEM)58
4.2.4 质粒抽提与标记58
4.2.5 不同比例Au DNEPs-FA/DNA复合物的制备58
4.2.6 Au DENPs-FA/DNA复合物的凝胶阻滞试验58
4.2.7 粒径与Zeta电势的测定58-59
4.3 实验结果与讨论59-63
4.3.1 UV-Vis和~1H NMR表征结果59-60
4.3.2 氨基定量60-61
4.3.3 透射电子显微镜(Tranission Electron Microscope,TEM)61
4.3.4 Au DENPs-FA与pDNA的结合情况61-62
4.3.5 粒径分布62-63
4.3.6 电势分布63
4.4 小结63-65
第五章 Au DENPs-FA的细胞毒性以及转染效率的探讨65-74
5.1 引言65
5.2 实验试剂和仪器设备65-66
5.3 实验策略66-67
5.3.1 MTT细胞毒性实验66
5.3.2 细胞转染实验66-67
5.3.2.1 荧光素酶表达实验66
5.3.2.2 绿色荧光蛋白表达实验66-67
5.3.3 细胞内吞实验67
5.3.4 叶酸受体屏蔽实验67
5.4. 结果与讨论67-72
5.4.1 细胞毒性实验67-68
5.4.2 细胞转染评价68-70
5.4.2.1 荧光素酶表达实验68-69
5.4.2.2 绿色荧光蛋白表达实验69-70
5.4.3 细胞内吞实验70-72
5.4.4 细胞靶向转染的评价72
5.5 小结72-74
第六章 结论与展望74-76