本站原创
摘要：耐高温α-淀粉酶是工业上最常用的酶制剂之一,广泛使用于淀粉加工、酿造、酒精以及纺织等工业中。寻求与开发耐受高热的淀粉酶长期以来始终是工业酶研究领域的与热点课题。极端嗜热古生菌Pyrococcus furiosus产生的胞外α-淀粉酶(PFA),具有很高的耐热性,更适宜的最适pH值以及不依赖Ca2+等优点,具有良好的应用前景和商业开发价值。主要克隆了PFA基因,在大肠杆菌中以包涵体的形式了大量的表达,并建立了一种新的简便高效的重组PFA纯化方法。PCR方法从Pyrococcus furiosus基因组中扩增出PFA基因,克隆至表达载体pT7473,实现了与His-tag的融合表达。尿素溶解和Ni-NTA亲和层析柱柱上复性纯化的方法,初步了PFA融合蛋白的纯品。N端His-tag融合对PFA的耐热性有一定的影响,又构建了PFA的表达载体,实现了在E.cop BL21-Codon Plus (DE3)-RIL菌株的大量表达,重组PFA包涵体的溶解与复性展开深入研究,PFA的特性,建立了一种碱性条件和加热的包涵体溶解方法,然后一步疏水层析柱纯化即可PFA蛋白纯品。本方法的活性蛋白量远高于已报道的其他方法,且蛋白的的耐热性质和比活与报道一致。新的纯化方法工艺简便、成本更低且易于放大,为未来工业化生产的建立与应用了有益的参考与借鉴.关键词：嗜热α-淀粉酶论文Pyrococcus论文furiosus论文包涵体论文热稳定性论文
摘要2-3
ABSTRACT3-6
综述6-22
引言22-24
章 His-PFA 融合蛋白在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化24-40
前言24
1. 实验24-26
2. 实验方法26-33
3. 结果与讨论33-39
小结39-40
章 PFA 的表达、纯化与基本性质研究40-60
前言40
1. 实验40-41
2. 实验方法41-47
3. 结果与讨论47-59
小结59-60
60-61