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摘要：在硝基咪唑和苯并咪唑问世三十年来,几乎没出现新的抗肠道寄生虫药物,与此同时,寄生虫感染率及其导致的死亡率仍然很高,在背景下,硝唑尼特(Nitazoxanide,NTZ)的出现显得。NTZ由勒马克实验室(Romark Laboratories)首创,是一种高效的广谱抗动物与人体寄生虫药物,1984年首次报道用于抗人体无钩绦虫(Taenia saginata)和微小膜壳绦虫(Hymenolepis nan)[1],现在越来越多的研究证明NTZ也表现出对厌氧细菌微生物和一些病毒的抵抗作用[2],还能地治疗人体肠道原生动物和蠕虫的感染。已在美国、拉丁美洲上市。在瑞士和法国,已获准在兽医领域应用,但是在我国尚未上市,也未见对NTZ的毒理学综合研究的报道,因此,对NTZ毒理学研究有助于对该药的研发和在国内兽医临床上的应用。在NTZ的毒理学研究中,了致突变性试验及对斑马鱼和蚯蚓的急性毒性试验。NTZ的致突变性试验按《新兽药特殊毒性试验技术要求》。Ames试验平板渗入法,阳性对照为二氨基芴和丝裂霉素C,并设溶剂(DMSO)对照,做一次试验,在加与不加S9条件下,NTZ在250.0μg/皿以下对TA97、TA98、TA100、TA102的回复突变菌落数与溶剂对照组和自发回变菌落数相近,无剂量反应关系,500.0μg/皿以上有抑菌作用,NTZ对测试菌株无致突变性;小鼠骨髓细胞微核试验间隔24h给药法,剂量为2.5g/kg·bw、1.25g/kg·bw和0.625g/kg·bw,设溶剂对照组和环磷酰胺阳性对照组,每只鼠计数1 000个嗜多染红细胞(PCE),观察含有微核的PCE数,计算PCE/NCE,结果,NTZ 3个剂量组的微核率在自然出现率范围内,阳性对照组微核率为26.7‰,与各剂量组及溶剂对照组比较有性差异(P0.01),NTZ对小鼠骨髓PCE微核发生无影响;小鼠精子畸形试验分组与微核试验相同,每天给药1次,连续5d,喂养35d后处死动物,显微镜下观察精子畸形率,NTZ连续给药3d后,出现被毛蓬松,活动减弱,食欲减低,体重减轻,高剂量组个别小鼠出现死亡,尸检发现有坏死性肠炎病变,给药动物在停药2d后恢复正常,结果,3个剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异无性,与阳性对照组比较有性差异(P0.01),NTZ对小鼠精子畸形发生率无影响,各组精子畸形构成以不定型、无钩、香蕉形居多。NTZ对斑马鱼和蚯蚓的急性毒性是评价生态毒性的指标,试验参照经济合作与发展组织(OECD)推荐的方法。斑马鱼急性毒性试验静水法,给药后24h、48h、72h和96h的临床表现并死亡数。斑马鱼急性中毒后,出现游动性减慢、呼吸困难和麻醉,鱼体周围出现白色絮状物,用药5h后出现死亡,死亡鱼体色和鳃颜色变淡,腹腔内容物偏黄,肠胃呈土。鱼死亡率随NTZ浓度增高而增高,随时间的增加而增高。经计算,NTZ对斑马鱼24h LC50为2.312mg/L,95%可信限为2.125 mg/L~2.515mg/L;48h和72h LC50为2.033mg/L,95%可信限为1.782 mg/L~2.318mg/L;96h LC50为1.968mg/L,95%可信限为1.717 mg/L~2.256mg/L。按鱼类急性毒性分级标准,NTZ属高毒类物质。NTZ对斑马鱼的LC100为3.63mg/L,LC0为1.00mg/L,安全浓度≤0.472mg/L。NTZ对赤子爱胜蚓的急性毒性试验滤纸法和土壤法。蚯蚓滤纸法接触NTZ后,出现活动性增强、有浅液体渗出,而后活动性减低,24h和48h检查,身体变软,有的环带肿胀,有的节间沟深陷、断成多节,死亡蚓环带肿大、出血、糜烂,滤纸上有黄褐色渗出物,整条蚯蚓成串珠状,存活蚯蚓活动性减低。NTZ滤纸法对蚯蚓24h LC50为1.50μg/cm2,95%可信限为1.28μg/cm2~ 1.75μg/cm2;48h LC50为0.81μg/cm2,95%可信限为0.74μg/cm2~0.89μg/cm2,空白对照组蚯蚓正常。蚯蚓接触含不同浓度NTZ的土壤后无中毒症状,24h和48h检查,可见死亡蚓体色变淡、体段呈苍白色,身体变软、变细,有的身体糜烂,有断裂现象,或节间沟深陷整条蚯蚓成串珠状,死亡蚯蚓多出现在48h内,较高剂量组存活蚯蚓活动性减弱,较低剂量组活动性正常,身体颜色发黄。NTZ自然土壤法对蚯蚓24h LC50为119.440 mg/kg,95%可信限为103.72 mg/kg~137.55mg/kg;48h至第4d LC50为108.44 mg/kg,95%可信限为95.92 mg/kg ~122.60mg/kg;第7d LC50为98.45mg/kg,95%可信限为88.62 mg/kg~109.37mg/kg;第10d至第14d LC50为95.33mg/kg,95%可信限为84.32 mg/kg~107.78mg/kg。空白对照组蚯蚓生长正常,无死亡。NTZ对蚯蚓的急性毒性较低,参照农药对蚯蚓毒性等级划分标准,属于低毒级。利什曼原虫(Leishmania donovani,L.d)是一种细胞内寄生的寄生虫,可感染人、哺乳动物和爬行动物等,引起共患的黑热病,是我国人群中五大寄生虫病之一。蛋白质二硫键异构酶(PDI),是与肽链的折叠和成熟密切的多功能蛋白,它催化蛋白质分子内天然二硫键的形成、打开和重排,是细胞膜上蛋白质硫键的调节酶,对细胞活性有很大影响,并与利什曼原虫毒力有关,研究NTZ对利什曼原虫PDI的影响,可初步探讨NTZ对利什曼原虫的作用机制。试验用酶生物化学法,以胰岛素为底物,测定并比较在6.25μg/mL~200μg/mL剂量范围内NTZ的活性,试验设空白对照组和阳性对照组,结果,在6.25μg/mL ~100μg/mL剂量范围内随剂量的增加,混合物在650nm处吸光值增加,NTZ对虫体PDI的活性有影响,NTZ可能作用于虫体的PDI。关键词：硝唑尼特论文致突变性论文生态毒性论文利什曼原虫论文蛋白质二硫键异构酶论文
缩略词表4-5
摘要5-7
ABSTRACT7-10
前言10-11
章 文献综述11-20
1 NTZ 的理化性质11
2 NTZ 的代谢动力学11-12
3 NTZ 的作用机制12-13
4 NTZ 的毒理学研究13-17
5 NTZ 的药效学研究17-19
6 展望19-20
章 NTZ 的致突变性研究20-32
节 NTZ Ames 试验20-26
节 小鼠骨髓细胞微核试验26-29
节 NTZ 对小鼠精子畸形试验29-32
章 NTZ 对斑马鱼和蚯蚓的急性毒性试验32-39
节 NTZ 对斑马鱼的急性毒性试验32-35
节 NTZ 对赤子爱胜蚓的急性毒性试验35-39
章 NTZ 对利什曼原虫PDI 活性的影响39-42
1 与方法39-40
2 结果40-41
3 讨论41-42
42-43