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摘要：目的：观察胰岛素样生长因子-1 (Insupn-pke Growth Factor-1, IGF-1)对受损血管内皮细胞(Vascular Endothepal Cell, VEC)增殖及存活的影响,并对其机制初步探讨。建立雪旺细胞、神经元、内皮细胞的共培养模型,为外周神经损伤研究打基础。方法：用不同浓度(10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml)的IGF-1作用于血管内皮细胞48h后,MTT法检测细胞的生长情况。划痕实验观察IGF-1对受损内皮细胞增殖的影响,并用PI染色观察细胞情况,ELISA法VEGF含量测定。组织块贴壁法、机械消化法分别培养雪旺细胞及神经元原代细胞,内皮细胞细胞株,并用S-100、β-tubupn-Ⅲ、vWF分别对其免疫学鉴定。用NB、DMEM/F-12混合培养基,生长周期不同先后将雪旺细胞、神经元、内皮细胞接种在培养皿里,37℃培养7d后免疫荧光鉴定。结果：浓度为Ong/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml的IGF-1对血管内皮细胞增殖都有不同的促进作用,浓度为40ng/ml、80ng/ml实验组与未加IGF-1的对照组比较,差异有统计学(P0.05),160ng/ml的IGF-1对细胞的增殖作用下降,差异无统计学(P 0.05)。取40ng/ml的IGF-1作用于受损血管内皮细胞48h后,细胞增殖速度较对照组加快,PI染色实验组死亡细胞减少,实验组培养液上清VEGF含量较对照组高,差异均有统计学(P0.05)。激光共聚焦显微镜下可见雪旺细胞呈长梭形,胞核呈卵圆形或长圆形,“海鱼状”排列生长。神经元胞体较小,从胞体长出长而细的突起,细胞间突起可连接成网状。内皮细胞胞体多呈梭形、三角形,团簇存在,胞核清晰,胞浆丰富,细胞生长活跃,成“铺路石”排列生长。：MTT法观察细胞增殖时发现,10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml的IGF-1对血管内皮细胞的增殖都有不同的促进作用(P0.05),160ng/ml的IGF-1对细胞增殖作用下降,差异无统计学(P0.05),提示IGF-1在低剂量时对内皮细胞的增殖有促进作用,且表现出一定的量效关系,40ng/ml作用,但高剂量(160ng/ml) IGF-1却对细胞增殖有抑制作用,具体机制有待探讨。IGF-1细胞增殖研究结果,观察IGF-1对受损内皮细胞存活和增殖的影响。以40ng/ml作为实验组,在倒置显微镜下观察到同时相点实验组划痕空白宽度比对照组缩窄；DAPI/PI双标记观察死亡细胞数目,实验组死亡细胞数较对照组少；对其分泌的细胞生长因子VEGF测定,观察到实验组经过IGF-1作用后内皮细胞分泌VEGF高于对照组,提示IGF-1可能促进受损内皮细胞的存活、增殖和迁移,以修复内皮细胞的损伤,其机制与其抑制细胞死亡和分泌营养因子VEGF有关,至于该作用具体的信号通路机制尚需以后深入研究。激光共聚焦显微镜下雪旺细胞、神经元、内皮细胞模型清晰可见,雪旺细胞为蓝色染色细胞,细胞呈长梭形,胞核呈卵圆形或长圆形,海鱼状排列生长。神经元细胞为绿色染色,胞体较小,从胞体长出长而细的突起,细胞间突起可连接成网状。内皮细胞为红色染色细胞,胞体细胞多呈梭形、三角形,胞核清晰,胞浆丰富,细胞生长活跃,成“铺路石”排列生长,共培养模型构建成功。关键词：IGF-1论文内皮细胞论文雪旺细胞论文神经元论文共培养论文
英汉缩略语名词对照5-6
中文摘要6-9
英文摘要9-12
前言12-15
研究一 IGF-1对受损血管内皮细胞存活及增殖的影响及其机制研究15-24
1 与方法15-19
2 结果19-21
3 讨论21-23
4 小结23-24
研究二 雪旺细胞、神经元细胞的原代培养及细胞鉴定24-33
1 与方法24-28
2 结果28-30
3 30-32
4 小结32-33
研究三 雪旺细胞、神经元细胞、内皮细胞共培养模型的建立及鉴定33-40
1 与方法33-37
2 结果37
3 讨论37-39
4 小结39-40
全文总结40-41