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【摘要】目的：探讨蛋白质芯片技术在妊娠期高血压疾病早期诊断中的应用效果。方法：选取2008年4月，2008年10月经我院妇产科确诊的妊娠期高血压疾病患者16例(实验组)和同期正常孕妇16例(对照组)，采用蛋白质芯片(SELDI)技术，比较两组血清差异蛋白质相对含量和血清蛋白质谱图差异。结果：在质荷比2000—20000D范围内。妊娠期高血压患者中(3189.885、3268.658、6516.054、13817.78)质荷比相对含量(11.36±3.93、16.42±4.65、6.15±0.41、9.52±0.82)明显高于正常分娩孕妇(1.91±0.48、4.68±0.81、2.71±1.23、3.76±1.4)，两组经统计学处理差异有显著性(P<0.05)。结论：(3189.885、3268.658、6516.054、13817.78)可能成为妊娠高血压疾病早期筛查的血清标志物。
【关键词】SELDI；妊娠并发症；高血压；血清标志物
妊娠期高血压(hyrpertensive disorder eomplicatingpregnaney，HDCP)是妊娠期特有的疾病，是严重危害母婴健康的特发性疾病，是导致孕产妇和围产儿死亡的前3位原因之一，在我国的发病率高达9.4％。目前其发病机理尚未完全阐明，在围产保健方面，HD—CP依然是监护的重点，对于早期高危孕妇的筛查并采取相对应的监护措施，具有十分重要的意义。本文采用蛋白质芯片(SELDI)技术，通过对妊娠期高血压疾病患者血清蛋白质与正常孕妇血清蛋白质的对比分析，旨在寻找诱发妊娠期高血压疾病的差异蛋白，筛选出特异生物标志物，探讨妊娠期高血压疾病的发病机理。
1 资料与方法
1.2.2 标本采集 两组对象于分娩前空腹采静脉血5ml，放置3h后经1000r／min离心处理，吸取血清标本，置于-80℃冷冻保存。
1.2.3 血清样本准备 取出冷冻血清样本，待融解后离心2min，量取101μl血清，加入20μl裂解液，冰浴振荡30min，加缓冲液360μl，混合摇匀。
1.2.4 芯片处理 将芯片装入芯片处理器，每孔中加入20tμl混合缓冲液，置入400—600r／min振荡器中振荡60min，待孔中液体甩出后，再重复操作1次。然后取出芯片，向每孔中加入0.5μlSPA，待干后，再加入0.5μlSPA，待干后进行上机测定。
1.2.5 芯片检测 用已知分子量蛋白标准品校正质谱仪，对芯片阅读参数进行设定；然后把处理好的芯片置人PBS一Ⅱc蛋白质芯片阅读器，完成数据读取并进行蛋白质谱分析。
1.3 统计学方法 采用Biomarker Wizard软件统计分析读取数据，计量数量以均数±标准差(x±s)表示，组间采用τ检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
设定妊娠高血压疾病组与正常分娩孕妇组各16份血清样本检测蛋白质分子量区间为2000～20000D。清除分子量低于2000D的蛋白质，得到125个波峰，通过Biomarker Wizard软件分析，两组血清样本中大多数表达量基本相同，共有19个表现出显著性差异(P<0.05)，其中妊娠高血压高表达量有12个，低表达量7个。12个高表达蛋白质中，质荷比大于2的筛选出4个，质荷比经统计学处理差异有显著性(P<0.05)，可能成为妊娠高血压疾病早期筛查的血清标志物，具体情况见图
蛋白质组学通过研究细胞或机体蛋白质的表达和活动方式，查找出特异性标志分子，实现早期筛查和早期诊断的目的。Merehant M和Weinberger S R通过研究证实，SELDI蛋白质芯片技术在不破坏所测蛋白质的基础上，将正常人与疾病患者蛋白质谱进行对照，可以发现和捕获特异性疾病的相关蛋白质。
本文采用SELDI—TOF—MS技术对妊娠期高血压患者血清蛋白质谱研究表明，正常分娩孕妇与妊娠期高血压孕妇绝大部分蛋白质谱基本一致，共发生有显著性差异蛋白质19个，其中呈高表达的12个，表达量下调的7个。在12个高表达蛋白质中，质荷比大于2的有4个(3189.885、3268.658、6516.054、13817.78)，这4个蛋白质不仅可能诱发妊娠高血压疾病发生，也极可能成为妊娠高血压疾病特异性血清标志物，由这4个蛋白质组成的蛋白质组可能成为妊娠期高血压患者的早期筛查指标，如果某孕妇血清蛋白质谱中出现了这4个蛋白质组成的蛋白质组，提示该孕妇有可能是妊娠高血压疾病患者或者说有可能诱发妊娠高血压疾病。
通过对这些蛋白质的深入研究，不仅可以进一步揭示妊娠期高血压的发病机理，更重要的是可以由此制定出个性化的治疗方案，及早进行监护，以减少妊娠期高血压疾病的发生率。
参考文献
林其德，叶太阳.重视妊娠期高血压疾病降压治疗.中国实用妇科与产科杂志，2011，(12)：881—882
苏海.关注妊高征的远期转归.中华高血压杂志，2007，15(3)：180—182
[3]乐杰.妇产科
[4]苏海.关注妊高征的远期转归.中华高血压杂志，2007，15(3)：180—182
[5]兰炎根，陈舒华.鼻咽癌蛋白质组学研究进展.海南医学，2010，(6)：111-114
[6]覃日吉，杨莉莉，覃小梅.妊娠高血压综合征患者同型半胱氨酸及血清钙、镁变化分析.海南医学，2011，(23)：32—33
【关键词】SELDI；妊娠并发症；高血压；血清标志物
妊娠期高血压(hyrpertensive disorder eomplicatingpregnaney，HDCP)是妊娠期特有的疾病，是严重危害母婴健康的特发性疾病，是导致孕产妇和围产儿死亡的前3位原因之一，在我国的发病率高达9.4％。目前其发病机理尚未完全阐明，在围产保健方面，HD—CP依然是监护的重点，对于早期高危孕妇的筛查并采取相对应的监护措施，具有十分重要的意义。本文采用蛋白质芯片(SELDI)技术，通过对妊娠期高血压疾病患者血清蛋白质与正常孕妇血清蛋白质的对比分析，旨在寻找诱发妊娠期高血压疾病的差异蛋白，筛选出特异生物标志物，探讨妊娠期高血压疾病的发病机理。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2008年4月一2008年10月经我院妇产科确诊的妊娠期高血压疾病患者16例和同期正常孕妇16例，根据乐杰《妇产科学》诊断标准随机分为妊娠高血压疾病实验组与正常分娩孕妇对照组。其中实验组妊娠期高血压患者7例，年龄25～32岁，孕周36—40周；子痫前期9例，年龄24—28岁，孕周34～40周；对照组正常孕妇16例，年龄26～32岁，孕周37～40周；两组均剔除妊娠合并高血压、肾炎、癫痫、脑炎、低血糖昏迷等影响血清蛋白质含量的相关疾病。1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂选取美国Ciphergen Biosys—terns公司生产的蛋白飞行质谱仪(PBS—Ⅱc)与弱阳离子交换蛋白芯片(CM10)；选取美国Sigma公司生产的9mmol／L尿素(urea)、芥子酸(SPA)。1.2.2 标本采集 两组对象于分娩前空腹采静脉血5ml，放置3h后经1000r／min离心处理，吸取血清标本，置于-80℃冷冻保存。
1.2.3 血清样本准备 取出冷冻血清样本，待融解后离心2min，量取101μl血清，加入20μl裂解液，冰浴振荡30min，加缓冲液360μl，混合摇匀。
1.2.4 芯片处理 将芯片装入芯片处理器，每孔中加入20tμl混合缓冲液，置入400—600r／min振荡器中振荡60min，待孔中液体甩出后，再重复操作1次。然后取出芯片，向每孔中加入0.5μlSPA，待干后，再加入0.5μlSPA，待干后进行上机测定。
1.2.5 芯片检测 用已知分子量蛋白标准品校正质谱仪，对芯片阅读参数进行设定；然后把处理好的芯片置人PBS一Ⅱc蛋白质芯片阅读器，完成数据读取并进行蛋白质谱分析。
1.3 统计学方法 采用Biomarker Wizard软件统计分析读取数据，计量数量以均数±标准差(x±s)表示，组间采用τ检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
设定妊娠高血压疾病组与正常分娩孕妇组各16份血清样本检测蛋白质分子量区间为2000～20000D。清除分子量低于2000D的蛋白质，得到125个波峰，通过Biomarker Wizard软件分析，两组血清样本中大多数表达量基本相同，共有19个表现出显著性差异(P<0.05)，其中妊娠高血压高表达量有12个，低表达量7个。12个高表达蛋白质中，质荷比大于2的筛选出4个，质荷比经统计学处理差异有显著性(P<0.05)，可能成为妊娠高血压疾病早期筛查的血清标志物，具体情况见图
1、表1。
妊娠期高血压疾病由于其较高的孕妇死亡率和围产儿病死率，其发病机理的研究一直是围产医学领域的一个难题，虽然通过免疫、基因方面的探讨，了解到了某些发病因素，但其机理尚未全面阐明。普遍认为由于环境和多基因的遗传背景，使得胎母免疫失衡，滋养细胞受累，造成胎盘缺血缺养，进而引起血管内皮激活与损伤，出现妊娠期高血压疾病。但究其本质原因，还是由于血清中蛋白分子的变化。蛋白质组学通过研究细胞或机体蛋白质的表达和活动方式，查找出特异性标志分子，实现早期筛查和早期诊断的目的。Merehant M和Weinberger S R通过研究证实，SELDI蛋白质芯片技术在不破坏所测蛋白质的基础上，将正常人与疾病患者蛋白质谱进行对照，可以发现和捕获特异性疾病的相关蛋白质。
本文采用SELDI—TOF—MS技术对妊娠期高血压患者血清蛋白质谱研究表明，正常分娩孕妇与妊娠期高血压孕妇绝大部分蛋白质谱基本一致，共发生有显著性差异蛋白质19个，其中呈高表达的12个，表达量下调的7个。在12个高表达蛋白质中，质荷比大于2的有4个(3189.885、3268.658、6516.054、13817.78)，这4个蛋白质不仅可能诱发妊娠高血压疾病发生，也极可能成为妊娠高血压疾病特异性血清标志物，由这4个蛋白质组成的蛋白质组可能成为妊娠期高血压患者的早期筛查指标，如果某孕妇血清蛋白质谱中出现了这4个蛋白质组成的蛋白质组，提示该孕妇有可能是妊娠高血压疾病患者或者说有可能诱发妊娠高血压疾病。
通过对这些蛋白质的深入研究，不仅可以进一步揭示妊娠期高血压的发病机理，更重要的是可以由此制定出个性化的治疗方案，及早进行监护，以减少妊娠期高血压疾病的发生率。
参考文献
林其德，叶太阳.重视妊娠期高血压疾病降压治疗.中国实用妇科与产科杂志，2011，(12)：881—882
苏海.关注妊高征的远期转归.中华高血压杂志，2007，15(3)：180—182
[3]乐杰.妇产科
摘自：硕士论文答辩www.udooo.com
学.北京：人民卫生出版社,2005：99-101[4]苏海.关注妊高征的远期转归.中华高血压杂志，2007，15(3)：180—182
[5]兰炎根，陈舒华.鼻咽癌蛋白质组学研究进展.海南医学，2010，(6)：111-114
[6]覃日吉，杨莉莉，覃小梅.妊娠高血压综合征患者同型半胱氨酸及血清钙、镁变化分析.海南医学，2011，(23)：32—33