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摘要：背景在20世纪50年代,沙利度胺曾作为一种镇静剂而广泛用于孕吐的治疗,随后却因其致畸作用而退市。但近年来,沙利度胺因其能降低患者体内TNF-a水平及抑制血管生成的作用而被FDA批准用于麻风结节性红斑及多发性骨髓瘤的治疗。此外,探讨者也陆续发现,沙利度胺还对多种经常规治疗策略无效的皮肤病有良好的治疗作用,但其治疗这些疾病的作用机制尚不明确。因沙利度胺具有免疫调节作用,很早就有学者推测沙利度胺可以用于银屑病的治疗。故在前期的临床实践中,我们采取沙利度胺治疗了部分患者后,发现沙利度胺对银屑病有一定的治疗作用。探讨发现树突状细胞及其分泌的IL-12和IL23、淋巴细胞及其分泌的IL-17和IL22,角质形成细胞及其分泌的TNF-a及VEGF在银屑病的发病机制中起着十分关键的作用。目前已有较多关于沙利度胺对树突状细胞及淋巴细胞影响的实验探讨,而沙利度胺对角质形成细胞作用的探讨则较为罕见,故有必要进一步探讨沙利度胺对角质形成细胞的作用。目的TNF-a是银屑病中核心的促炎症细胞因子之一,角质形成细胞过度增殖及真皮层毛细血管增生是银屑病皮损中最为典型的组织病理学体现。TNF-a与角质形成细胞过度增殖在银屑病中所起的关键作用已被目前广泛用于重度银屑病治疗的TNF-a拮抗剂及甲氨蝶呤的显著疗效所证实；在动物模型中,抗血管生成药也可以显著改善银屑病样皮损。故我们拟通过探讨沙利度胺对角质形成细胞活性的影响及其对角质形成细胞VEGF和TNF-a表达的影响,以进一步了解沙利度胺在皮肤疾病治疗中的作用机制,并为沙利度胺用于银屑病的治疗提供实验基础。策略1)体外培养HaCaT细胞。2)WST-l法检测不同浓度沙利度胺对HaCaT细胞活性的影响。3)通过引物设计及验证和调整反应系统扩增效率使实时定量PCR反应系统满足通过2-ΔΔCt法浅析相对基因表达差别的条件。4)实时定量PCR法测定不同时间点沙利度胺对HaCaT细胞合成VEGF与TNF-α mRNA的影响。5)实时定量PCR法测定不同浓度沙利度胺对HaCaT细胞合成VEGF与TNF-α mRNA的影响。5) ELISA法测定不同浓度沙利度胺对HaCaT细胞分泌VEGF与TNF-a蛋白的影响。结果1)当沙利度胺浓度≤100nM时,对HaCaT细胞增殖无影响；当沙利度胺浓度为1000nM时,HaCaT细胞活性受到抑制,约为对照组的90.8%；沙利度胺浓度≥1000nM时,其抑制HaCaT细胞活性的作用呈浓度依赖方式。2)在3小时、6小时、9小时、12小时4个时间点中,当沙利度胺作用HaCaT细胞3小时后,VEGF及TNF-a mRNA表达水平分别为对照组51.0%及53.1%,此时沙利度胺对其合成VEGF及TNF-a mRNA的抑制作用最为显著。3)0.01nM沙利度胺作用HaCaT细胞3小时后,VEGF mRNA与蛋白表达水平分别为对照组的63.4%及92.3%；当浓度0.01nM时,沙利度胺对HaCaT细胞VEGF mRNA及蛋白的表达有抑制作用,其作用呈现浓度依赖方式。4)沙利度胺浓度≤0.01nM时,对HaCaT细胞合成TNF-a mRNA及蛋白无抑制作用；0.1nM沙利度胺作用HaCaT细胞3小时后, TNF-a mRNA与蛋白表达水平分别为对照组的58.7%及61.7%；当浓度0.1nM时,沙利度胺对HaCaT细胞TNF-a mRNA的表达有抑制作用,其抑制程度与浓度无关；同时,沙利度胺对HaCaT细胞TNF-a蛋白的表达有抑制作用,其作用呈浓度依赖方式。结论1)沙利度胺浓度≥1000nM时可抑制HaCaT细胞的活性。2)沙利度胺在mRNA与蛋白水平上均可抑制HaCaT细胞VEGF与TNF-a的表达。3)沙利度胺可能因其抑制角质形成细胞活性及减少VEGF和TNF-a分泌的作用而作为一种银屑病治疗药物,应对沙利度胺的作用机制及临床运用进行进一步的探讨。关键词：沙利度胺论文银屑病论文角质形成细胞论文血管内皮细胞生长因子论文肿瘤坏死因子α论文
缩略词表4-6
中文摘要6-8
ABSTRACT8-11
1 前言11-15
2 材料与策略15-31
3 实验结果31-52
4 讨论52-56
5 结论56-57
6 革新点与不足57-58
7 参考文献58-61
综述(一)61-69