您的位置: turnitin查重官网> 护理 >> 外科护理 >探究基质康莱特对UVB照射后肤成纤维细胞MMP1,MMP3表达影响学术

探究基质康莱特对UVB照射后肤成纤维细胞MMP1,MMP3表达影响学术

收藏本文 2024-03-19 点赞:28373 浏览:123779 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:目的:本探讨通过观察中药薏苡仁提取物康莱特(KLT)对中波紫外线(ultrioletB,UVB)照射的体外培养肤成纤维细胞的基质金属蛋白酶1、3(Matrix Metallo Proteinases, MMP1、MMP3) mRNA及蛋白表达的影响,进一步探讨康莱特(KLT)是否抗光老化的药理作用。策略:采取酶消化法和组织块法培养肤成纤维细胞;MTT法检测康莱特对肽成纤维细胞增殖的影响;用不同辐照剂量UVB照射细胞后用实时荧光定量技术(RT-PCR)检测MMP1,MMP3mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MMP1, MMP3蛋白水平;30mJ/cm2UVB照射细胞后分组分别加入1、2.5、5μL/mL康莱特基质及康莱特,用同上策略检测MMP1,MMP3mRNA及蛋白水平。结果:肤成纤维细胞倍增时间较短,0-1d为潜伏期,1-3d为细胞增殖期,3-5d为对数生长期而5-7d为平台期。第6代之后细胞逐渐失去活力,生长缓慢,形态不规则。经MTT法检测加入不同浓度的康莱特细胞组结果显示与未加康莱特组比较,差别无统计学作用(p0.05)。30mJ/cm2UVB照射细胞组的MMP1, MMP3mRNA及蛋白表达水平与无UVB照射组的差别有统计学作用(p0.05)。30mJ/cm2UVB照射细胞组加入不同浓度基质及康莱特MMP1, MMP3mRNA及蛋白表达水平与对照组的差别有统计学作用(p0.05)。结论:人成纤维细胞可在较短时间内获得,第2代到第5代细胞增殖能力较强且生长稳定,宜用于实验。康莱特对肤成纤维细胞的增殖无影响。康莱特可有效降低UVB照射后的肤成纤维细胞MMP1, MMP3mRNA及蛋白的表达,且有剂量-效应联系。所以我们推测其有抗光老化的药理作用。关键词:薏苡仁论文基质金属蛋白酶论文成纤维细胞论文光老化论文实时荧光定量论文酶联免疫吸附试验论文

    中文摘要4-5

    Abstract5-6

    目录6-8

    縮略语/符号说明8-9

    前言9-10

    探讨近况、成果9

    探讨目的、策略9-10

    一、肤成纤维细胞的培养10-19

    1 材料与策略10-12

    1.1 材料10

    1.1.1 主要仪器10

    1.1.2 主要试剂10

    1.2 策略10-12

    1.2.1 成纤维细胞的分离与培养10-11

    1.2.2 成纤维细胞传代培养11-12

    1.2.3 成纤维细胞的冻存12

    1.2.4 成纤维细胞的复苏12

    1.2.5 成纤维细胞生长曲线的绘制及形态学观察12

    2 结果12-17

    2.1 肤成纤维细胞的形态学观察12-16

    2.2 人成纤维细胞生长曲线16-17

    3 讨论17-18

    4 小结18-19

    二、康莱特对人成纤维细胞MMP1,MMP3 mRNA表达的影响19-36

    1 材料与策略19-23

    1.1 材料19-20

    1.1.1 主要仪器19

    1.1.2 主要试剂19-20

    1.2 策略20-23

    1.2.1 实验步骤20-21

    1.2.2 MTT法检测康莱特对肤成纤维细胞增殖的影响21-22

    1.2.3 UVB照射22

    1.2.4 实时定量荧光PCR检测MMP1,MMP3 mRNA的表达22-23

    2 结果23-31

    2.1 康莱特对肤原代成纤维细胞增殖的影响23-25

    2.2 实时荧光定量PCR检测结果25-31

    2.2.1 GAPDH与MMP1,MMP3扩增曲线及溶解曲线,见图2-725-28

    2.2.2 实时荧光相对定量结果28-31

    3 讨论31-34

    4 小结34-36

    三、康莱特对人成纤维细胞MMP1,MMP3蛋白分泌的影响36-42

    1 材料和策略36-37

    1.1 材料36

    1.2 策略36-37

    1.2.1 主要仪器36

    1.2.2 主要试剂36

    1.2.3 主要步骤36-37

    2 结果37-40

    2.1 UVB照射后24h成纤维细胞MMP1分泌水平37-38

    2.2 UVB照射后加入不同浓度康莱特及基质培养24h成纤维细胞MMP #1分泌水平38-39

    2.3 UVB照射后24h成纤维细胞MMP3分泌水平39

    2.4 UVB照射后加入不同浓度康莱特及基质培养24h成纤维细胞MMP #1分泌水平39-40

    3 讨论40-41

    4 小结41-42

    结论42-43

copyright 2003-2024 Copyright©2020 Powered by 网络信息技术有限公司 备案号: 粤2017400971号