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摘要：目的：骨质疏松症（Osteoporosis，OP）作为一种“静悄悄的流行病”逐渐被认识。大量探讨证实，1型糖尿病（Type1diabetic metabop，T1DM）可导致骨质疏松症的发生，但2型糖尿病（Type2diabeticmetabop，T2DM）与骨质疏松症的联系尚不明确，有探讨认为这可能与胰岛素信号通路有关。胰岛素信号通路的主要下游分子因子磷脂酰肌醇3-激酶（Phosphoinositide3-kinase，PI3K）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）表达下降在糖尿病和胰岛素抵抗发病机制中起重要作用。核因子κB（NFκB）信号通路可诱导破骨细胞分化、延长破骨细胞存活时间、推动骨吸收。探讨发现PI3K-Akt信号通路通过调节NFκB、mTOR（mammapantarget of rapamycin)等下游因子对细胞增殖、凋亡、葡萄糖转运等多种生物活动起调节作用。胰岛素抵抗主要发生在肾脏和骨骼肌，但在糖尿病晚期往往并发糖尿病肾病，同时肾脏通过调节成骨细胞、破骨细胞之间的平衡参与骨质疏松的发生、进展历程。2型糖尿病合并骨质疏松肾组织PI3K、Akt、NFκB表达如何，目前尚无报道，本探讨旨在探讨PI3K、Akt、NFκB在2型糖尿病合并骨质疏松大鼠肾组织表达，为探讨糖尿病骨质疏松的发病机制提供实验依据和论述基础。策略：100只健康雌性Wistar大鼠（2.5-3月龄）喂养1周后随机分为正常对照组（检测手术组，NS组，N=24），单纯去卵巢组（NOVX组，N=26），2型糖尿病对照组（检测手术组，DS组，N=24），2型糖尿病去卵巢组（DOVX组，N=26）。组间大鼠体重差别无统计学作用。去卵巢后4周、8周、12周各组随机选取5只大鼠，麻醉处死后分离肾脏，肾组织取材并提取肾组织总RNA，运用免疫组织化学策略检测NS组、NOVX组、DS组、DOVX组肾组织PI3K、Akt1、Akt2、NFκB蛋白水平的表达，反转录聚合酶链反应(RT-PCR)策略检测PI3K、Akt1、Akt2、NFκB mRNA水平的表达。运用SPSS13.0统计软件处理实验数据，所有实验数据均采取均数±标准差（x±s）表示，计量资料多组间比较采取方差浅析，P0.05认为有统计学作用。结果：1肾脏病理变化（HE染色）：光镜下可见非糖尿病组肾脏肾小球结构清晰，肾小球血管袢薄而清晰。内皮细胞和系膜细胞数目正常。NS组与NOVX组无显著区别。DS组及DOVX组肾脏肾小球毛细血管内可见嗜酸性物质增加，内皮细胞和系膜细胞数量增加。2肾脏PI3K表达水平2.1免疫组化结果：PI3K表达于肾小管上皮细胞胞核和胞浆。去卵巢后4周、8周时，DOVX组、DS组表达显著低于NS组（P0.05），NOVX组与NS组之间无显著差别（P＞0.05）；去卵巢后12周时，NOVX组、DS组、DOVX组表达显著低于NS组（P0.05），DS组与DOVX组之间无显著差别（P0.05）。2.2RT-PCR结果：去卵巢后4周时NOVX组显著高于NS组（P0.05），DOVX组显著低于DS组（P0.05），DS组和DOVX组分别显著高于NS组和NOVX组（P0.05）；去卵巢后8周时NOVX组显著低于NS组（P0.05），DOVX组显著高于DS组和NOVX组（P0.05），DS组显著低于NS组（P0.05）；12周时NOVX组显著高于NS组（P0.05），DOVX组显著低于DS组和NOVX组（P0.05），DS组显著高于NS组（P0.05）。3肾脏Akt1表达水平3.1免疫组化结果：Akt1表达于肾小管上皮细胞胞浆。去卵巢后4周、8周时DOVX组、DS组表达显著低于NS组（P0.05），NOVX组与NS组之间无统计学差别（P0.05）；去卵巢后12周DOVX组、DS组、NOVX组、NS组之间无显著差别（P0.05）。3.2RT-PCR结果：去卵巢后4周时NOVX组低于NS组，但无统计学差别（P0.05），DOVX组显著低于DS组（P0.05），DS组显著高于NS组（P0.05），DOVX组低于NOVX组，但无统计学差别（P0.05）；去卵巢后8周NOVX组显著高于NS组（P0.05），DOVX组高于DS组，但无统计学差别（P0.05），DS组显著低于NS组（P0.05），DOVX组显著低于NOVX组（P0.05）；去卵巢后12周NOVX组显著高于NS组（P0.05），DOVX组显著低于DS组（P0.05），DS组显著高于NS组（P0.05），DOVX组显著低于NOVX组（P0.05）。4肾脏Akt2表达水平4.1免疫组化结果：Akt2主要表达于肾小管上皮细胞胞浆。去卵巢后4周时DOVX组、DS组、NOVX组表达显著低于NS组（P0.05）；去卵巢后8周DS组表达显著低于DOVX组、NS组、NOVX组（P0.05），DOVX组、NOVX组显著低于NS组（P＜0.05）；去卵巢后12周DOVX组、DS组、NOVX组表达显著低于NS组（P0.05）。4.2RT-PCR结果：去卵巢后4周NOVX组显著高于NS组（P0.05），DOVX组显著低于DS组（P0.05）,DS组低于NS组，但无统计学差别（P0.05），DOVX组显著低于NOVX组（P0.05）；去卵巢后8周NOVX组高于NS组，DOVX组低于DS组，DS组低于NS组，DOVX组低于NOVX组，但均无统计学差别（P0.05）；去卵巢后12周NOVX组显著高于NS组（P0.05），DOVX组显著低于DS组（P0.05），DS组显著低于NS组（P0.05），DOVX组显著低于NOVX组（P0.05）。5肾脏NFκB表达水平5.1免疫组化结果：NFκB主要表达于肾小管上皮细胞胞浆。去卵巢后4周、8周时NS组、NOVX组、DS组、DOVX组之间无显著差别（P0.05）；去卵巢后12周DS组表达显著低于NS组（P0.05），DOVX组、NOVX组与DS组、NS组之间无显著差别（P0.05）。5.2RT-PCR结果：NFκB表达在去卵巢后4周时NOVX组显著高于NS组（P0.05），DOVX组低于DS组，但无统计学差别（P0.05），DS组显著高于NS组（P0.05），DOVX组低于NOVX组，但无统计学差别（P0.05）；去卵巢后8周NOVX组高于NS组，但无统计学差别（P0.05），DOVX组显著低于DS组（P0.05），DS组显著低于NS组（P0.05），DOVX组显著低于NOVX组（P0.05）；去卵巢后12周时NOVX组显著高于NS组（P0.05），DOVX组显著低于DS组（P0.05），DS组显著高于NS组（P0.05），DOVX组显著低于NOVX组（P0.05）。结论：1单纯去卵巢大鼠PI3K、Akt1、Akt2、NFκB在肾组织表达较正常对照组大鼠显著降低。22型糖尿病大鼠PI3K、Akt1、Akt2、NFκB在肾组织表达较正常对照组大鼠降低。32型糖尿病骨质疏松大鼠PI3K、Akt1、Akt2在肾组织表达较正常对照组、单纯去卵巢组及2型糖尿病组大鼠降低4肾脏胰岛素信号通路中PI3K、Akt1、Akt2、NFκB表达受抑制可能与2型糖尿病合并骨质疏松症的发病有关。关键词：2型糖尿病骨质疏松论文大鼠论文肾组织论文PI3K论文Akt1论文Akt2论文NFκB论文
摘要4-8
ABSTRACT8-13
前言13
材料与策略13-18
结果18-21
附图21-27
附表27-30
讨论30-34
结论34