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摘要：第一部分静脉注射罗格列酮干预大鼠急性胰腺炎量效联系的探讨目的：探讨罗格列酮(rosigptazone, ROSI)静脉注射给药,干预大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)模型的量效联系,为ROSI干预急性胰腺炎肺损伤(acute pancreatitis associated-lung injury, APALI)选择合适的用药剂量提供依据。策略：雄性Wistar大鼠42只,体重200～250g,随机分为7组(N=6)：正常对照组(control group, CON组)、急性胰腺炎模型组(acute pancreatitis model group,AP组)、罗格列酮0.3mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg预处理组(rosigptazone pretreatment group, ROSI组)和药物对照组(drug control group, Drug-CON组)。实验前大鼠禁食12 h,自由饮水。10%水合氯醛腹腔注射(0.3ml/100g)麻醉,无菌操作下大鼠行上腹正中切口进腹,逆行穿刺胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液(sodium taurocholate, STC) (0.1ml/100g)制备急性胰腺炎模型；CON组和Drug-CON组操作如上所述,但胆胰管内注射等容量生理盐水。CON组、AP组造模前30min经股静脉注射10%二亚砜(dimethyl sulphoxide, DMSO)溶液(0.2ml/100g)；不同剂量梯度罗格列酮预处理组则注射等量、10%DMSO溶解的ROSI。大鼠术后12 h心脏取血分离血清,全自动生化仪检测各组血清淀粉酶(amylase, AMY)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotranerase, ALT)水平。HE染色观察各组胰腺组织病理学转变并评分。药物对照组操作同正常对照组,根据干预效果选择最佳剂量的ROSI,术前30min经股静脉注射最佳剂量ROSI取代10% DMSO,术后12h检测其血清AMY、ALT水平变化,观察胰腺组织病理学转变并评分。结果：0.3mg/kg、3 mg/kg ROSI预处理组血清AMY和血清ALT与AP组比较差别无统计学作用(P0.05),胰腺组织病理学评分有所改善,差别有统计学作用(P0.05)；6mg/kg ROSI预处理组血清AMY、血清ALT和胰腺组织病理学评分较AP组降低,差别有统计学作用(P0.05),10 mg/kg ROSI预处理组血清AMY、胰腺组织病理学评分较AP组降低,差别有统计学作用(P0.05),但血清ALT与AP组比较差别无统计学作用(P0.05)。6 mg/kg和10 mg/kg ROSI预处理组间比较,上面陈述的指标差别无统计学作用(P0.05)。药物对照组(6 mg/kg)血清AMY、血清ALT和胰腺组织病理学评分与CON组比较差别无统计学作用(P0.05)。结论：罗格列酮干预牛磺胆酸钠诱导的大鼠AP模型时,6 mg/kg静脉注射是安全、有效的剂量。第二部分罗格列酮对大鼠急性胰腺炎肺损伤的作用目的：探讨罗格列酮(rosigptazone, ROSI)静脉给药对大鼠急性胰腺炎肺损伤(acute pancreatitis associated-lung injury, APALI)的作用。策略：雄性Wistar大鼠54只,体重200～250g,随机分为3组(N=18)：正常对照组(control group, CON组)、急性胰腺炎模型组(acute pancreatitis model group, AP组)和罗格列酮预处理组(rosigptazone pretreatment group, ROSI组)。实验前大鼠禁食12 h,自由饮水。10%水合氯醛腹腔注射(0.3ml/100g)麻醉,大鼠无菌操作下行上腹正中切口进腹,逆行穿刺胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液(sodium taurocholate, STC) (0.1ml/100g)制备急性胰腺炎模型；CON组操作如上所述,但胆胰管内注射等容量生理盐水。CON组、AP组造模前30min经股静脉注射10%二亚砜(dimethyl sulphoxide, DMSO)溶液(0.2ml/100g)；ROSI组造模前30min经股静脉注射10%DMSO溶解的ROSI (6 mg/kg)。术后3h、6h、12h分批剖杀大鼠,每个时间点6只。HE染色观察各组胰腺组织和肺脏病理学转变并评分。心脏取血分离血清,全自动生化仪检测各组血清淀粉酶(amylase, AMY)水平。比色法检测肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性(间接表示中性粒细胞浸润程度)。左主支气管穿刺插管行支气管肺泡灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lage fluid, BALF)并检测其蛋白含量(反应肺毛细血管渗透性)。取右肺中叶拭去肺组织表面血迹及水分后称湿重,置于70℃烘箱24h后称干重,计算肺湿干比(W/D)(反应肺脏水肿程度)。结果：随着时间的延长,AP组血清AMY水平、肺脏MPO活性、肺脏W/D比值、BALF蛋白含量、胰腺和肺组织评分逐渐升高,至12 h达最高值,分别为(5353.0±728.2)U/L、(1.12±0.14)U/g、(3.00±0.14)、(0.438±0.056)g/L、(11.17±0.93)和(8.17±0.75)；上面陈述的指标在各时点均高于CON组,差别有统计学作用(P0.05)。ROSI组上面陈述的指标均较AP组有所下降,以6h、12h差别有统计学作用(P0.05)。结论：罗格列酮通过减低肺组织MPO活性,降低肺脏水肿程度和肺毛细血管渗透性,对急性胰腺炎肺损伤具有保护作用。第三部分罗格列酮对大鼠急性胰腺炎肺损伤保护作用的机制探讨目的：探讨罗格列酮(rosigptazone, ROSI)静脉给药对大鼠急性胰腺炎肺损伤(acute pancreatitis associated-lung injury, APALI)保护作用的机制。策略：雄性Wistar大鼠54只,体重200～250g,随机分为3组(N=18)：正常对照组(control group, CON组)、急性胰腺炎模型组(acute pancreatitis model group, AP组)和罗格列酮预处理组(rosigptazone pretreatment group, ROSI组)。实验前大鼠禁食12 h,自由饮水。10%水合氯醛腹腔注射(0.3ml/100g)麻醉,大鼠无菌操作下行上腹正中切口进腹,逆行穿刺胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液(sodium taurocholate, STC) (0.1ml/100g)制备急性胰腺炎模型；CON组操作如上所述,但胆胰管内注射等容量生理盐水。CON组、AP组造模前30min经股静脉注射10%二亚砜(dimethyl sulphoxide, DMSO)溶液(0.2ml/100g)；ROSI组造模前30min经股静脉注射10%DMSO溶解的ROSI (6mg/kg)。术后3h、6h、12h分批剖杀大鼠。免疫组化法检测肺组织核因子-κB (nuclear factor-kappa B, NF-κB) p65的表达水平。逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-reverse transcription, RT-PCR)检测肺组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a, TNF-α)、细胞问粘附分子-1(intercellular adhesion molecule, ICAM-1)、P-选择素(P-selectin) mRNA表达水平。Western blot法检测肺组织ICAM-1、P-selectin蛋白的表达水平。结果：随着时间的延长,AP组肺脏NF-κB评分、TNF-a mRNA表达、ICAM-1 mRNA表达和P-selectin mRNA表达逐渐升高,均在12h达高峰,分别为(1.04±0.13)、(0.57±0.03)、(1.53±0.08)、(0.51±0.09)；上面陈述的指标在各时点均高于CON组,差别有统计学作用(P0.05)。ROSI组肺脏NF-κB评分和TNF-αmRNA较AP组下降,以6h、12h差别有统计学作用(P0.05)。ROSI组肺脏ICAM-1、P-selectin mRNA和蛋白表达在12h点较AP组下降,差别有统计学作用(P0.05)。结论：罗格列酮通过抑制肺组织NF-κB和TNF-α,减少ICAM-1、P-selectin的表达,对大鼠急性胰腺炎肺损伤具有保护作用。关键词：急性胰腺炎论文罗格列酮论文剂量-效应联系论文急性胰腺炎论文肺损伤论文罗格列酮论文急性胰腺炎论文肺损伤论文罗格列酮论文粘附分子论文
中文摘要6-10
Abstract10-19
第一部分 静脉注射罗格列酮干预大鼠急性胰腺炎量效联系的探讨19-36
材料19-20
策略20-24
结果24-25
讨论25-28
结论28-29
附图一29-32