试述活性氧LP（a）对小鼠性内皮祖细胞损伤作用初步题目

摘要：目的：初步探讨心血管疾病独立危险因子脂蛋白（a）[LP（a）]对小鼠性内皮祖细胞（EPCs）的损伤作用及其可能的机制。策略：实验分为6组：①对照组，加等量含200μmol/L EDTA的全培养液；②1μg/ml的LP（a）处理组，③10μg/ml LP（a）处理组，④100μg/ml的LP（a）处理组，⑤300μg/ml LP（a）处理组，⑥600μg/ml LP（a）处理组。贴壁法分离与培养内皮祖细胞（EPCs），摄取ac-LDL和结合UEA-1鉴定EPCs，MTT法检测细胞存活与增殖，transwell测定细胞迁移，明胶粘附法测定EPCs的粘附，基质胶上种植EPCs，photshop7.0计算血管长度，显微镜下观测单个细胞克隆大小和克隆数目，RT-PCR和western blotting分别检测一氧化氮合酶（eNOS）的mRNA水平和蛋白表达情况，细胞免疫组织化学技术检测eNOS蛋白在EPCs的表达和分布情况，并采取DCFH-DA染色法检测细胞内活性氧（ROS）的量，采取Griess试剂法测定一氧化氮（NO）水平。结果：①采取贴壁法能以小鼠鼠骨髓的单个核细胞中分离出纯度达70%以上的EPCs。②LP（a）剂量依赖性影响EPCs存活，100μg/ml LP（a）开始对EPCs产生一定的破坏作用，300μg/ml LP（a）对EPCs的破坏作用急速加大。③1μg/mlLP（a）即能显著抑制EPCs的迁移，当LP（a）浓度达到10μg/ml时，迁移到下槽的细胞数目大大减少，其迁移细胞数不到对照组的1/6，LP（a）浓度为100μg/ml时，其迁移细胞数减少到对照组的1/9，300μg/ml时其迁移细胞数约为对照组的1/14。④LP（a）剂量依赖性抑制EPCs的粘附。1μg/ml的LP（a）可显著减少EPCs粘附细胞数目（145.2±8.4个/每个视野vs115.2±12.6个/每个视野，P＜0.05，n=5），当LP（a）的浓度达到10μg/ml时，EPCs粘附能力进一步下降，下降到对照组的1/2，当LP（a）的浓度达到100μg/ml时下降到对照组的约1/3，当LP（a）的浓度达到300μg/ml时，EPCs粘附能力下降最显著，其下降到对照组的约1/16。⑤EPCs经10μg/ml LP（a）处理后，血管形成能力的显著受到损伤，当LP（a）的浓度增加到100μg/ml时，EPCs的血管形成能力大大减弱，已经不到对照组的1/4（36.34±1.54mm/每个视野vs8.76±0.62mm/每个视野，P＜0.001，n=5）；当LP（a）的浓度增加到300μg/ml时，差不多已经见不到完整的血管样结构。⑥经100μg/ml的LP（a）处理后，不但克隆数目显著减少（10.2±1.3vs3.1±0.4，P＜0.01，n=5），而且克隆生长显著受到抑制。⑦机制探讨发现： EPCs经过100μg/ml的LP（a）处理后， eNOS mRNA和蛋白表达均显著下调，一氧化氮（NO）显著减少（36.35±3.91vs3.91±0.79，P＜0.001，n=3）。活性氧检测结果表明，在1μg/ml LP（a）作用下，活性氧产生显著增加（1±0.12vs3.92±0.36，P＜0.05，n=5）；当LP（a）的浓度为10μg/ml时，荧光强度是对照组的近15倍；当LP（a）的浓度为100μg/ml时，与前述各组相比较，胞内绿色荧光强度和发出绿色荧光的细胞均增加（图12D），其荧光强度是对照组的31倍多，是1μg/mlLP（a）的近8倍，是10μg/ml LP（a）的2倍多。结论：①LP（a）浓度依赖性地抑制EPCs增殖；②LP（a）浓度依赖性地抑制EPCs迁移；③LP（a）浓度依赖性地抑制EPCs粘附；④LP（a）浓度依赖性地抑制EPCs血管形成能力；⑤LP（a）抑制EPCs的克隆形成；⑥LP（a）对EPCs的损伤作用与抑制eNOS表达和NO生成有关，还与推动活性氧生成有关。关键词：内皮祖细胞论文脂蛋白（a）论文损伤论文一氧化氮合酶论文增殖论文迁移论文粘附论文克隆形成单位论文血管样结构论文活性氧论文
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主要缩略语英文索引4-5

中文摘要5-7

ABSTRACT7-10

引言10-12

1 材料与策略12-19

2 结果19-37

3 讨论37-40

结论40-41