中文摘要4-6
Abstract6-13
第1章 前言13-27
1.1 肠出血性大肠杆菌介绍13-18
1.1.1 肠出血性大肠杆菌的发现历史13
1.1.2 肠出血性大肠杆菌的基本特点13-14
1.1.3 肠出血性大肠杆菌的血清型14
1.1.4 肠出血性大肠杆菌的毒力因子14-15
1.1.5 肠出血性大肠杆菌的流行病学特点15-17
1.1.6 临床症状17
1.1.7 治疗17-18
1.2 肠出血性大肠杆菌的检测18-21
1.2.1 细菌分离法18
1.2.2 血清学检测策略18-19
1.2.3 免疫学检测策略19-20
1.2.4 分子生物学检测策略20-21
1.3 CPA 技术及运用21-25
1.3.1 CPA 策略的概述21
1.3.2 CPA 策略的特点21-22
1.3.3 cpa 反应原理22-24
1.3.4 CPA 反应系统24-25
1.3.5 CPA 反应产物的检测策略25
1.3.6 CPA 法的运用25
1.4 本探讨的目的和作用25-27
第2章 材料与策略27-39
2.1 实验材料27-29
2.1.1 实验菌株27
2.1.2 主要实验仪器27-28
2.1.3 主要试剂28-29
2.2 实验策略29-39
2.2.1 主要试剂与培养基的配制29-30
2.2.2 引物及探针设计30-31
2.2.3 细菌基因组的提取31-32
2.2.4 肠出血性大肠杆菌 stx1 基因片断重组质粒的构建32-34
2.2.5 CPA 及 PCR 反应系统的建立34
2.2.6 CPA 及 PCR 产物的浅析34-35
2.2.7 CPA 反应条件的优化35-36
2.2.8 CPA 扩增反应引物特异度验证36-37
2.2.9 肠出血性大肠杆菌灵敏度检测37-39
第3章 实验结果39-56
3.1 肠出血性大肠杆菌 stx1 基因片断阳性质粒的构建39-42
3.1.1 PCR 扩增肠出血性大肠杆菌 stx1 基因片断结果39
3.1.2 肠出血性大肠杆菌重组质粒菌落 PCR 鉴定结果39-40
3.1.3 肠出血性大肠杆菌 stx1 基因片断阳性质粒的测序结果40-42
3.2 CPA 扩增系统的初步建立42
3.3 CPA 扩增系统的优化结果42-49
3.3.1 Mg2+浓度的确定42-43
3.3.2 dNTPs 浓度的确定43-44
3.3.3 甜菜碱浓度的确定44-45
3.3.4 Bst DNA 聚合酶添加量的确定45-46
3.3.5 引物浓度的确定46-47
3.3.6 反应温度的确定47-48
3.3.7 反应时间的确定48-49
3.3.8 CPA 反应最终系统及条件49
3.4 CPA 扩增产物的浅析49-51
3.4.1 CPA 扩增产物的电泳结果浅析49-50
3.4.2 CPA 扩增产物核酸荧光染料结果浅析50-51
3.4.3 CPA 扩增产物一次性核酸检测装置结果浅析51
3.5 CPA 反应系统的特异性探讨51-52
3.6 肠出血性大肠杆菌灵敏度检测的探讨52-56
3.6.1 肠出血性大肠杆菌重组质粒的灵敏度检测52-54
3.6.2 肠出血性大肠杆菌纯培养物的灵敏度检测54-56
第4章 讨论56-62
4.1 靶基因的选择56-57
4.2 CPA 反应条件的优化57-59
4.2.1 Mg2+浓度对 CPA 反应的影响57
4.2.2 dNTPs 浓度对 CPA 反应的影响57
4.2.3 甜菜碱浓度对 CPA 反应的影响57-58
4.2.4 Bst DNA 聚合酶添加量对 CPA 反应的影响58
4.2.5 引物浓度对 CPA 反应的影响58
4.2.6 反应温度对 CPA 反应的影响58-59
4.3 CPA 扩增产物的三种浅析策略比较59
4.4 CPA 法检测肠出血性大肠杆菌的策略学评价59-60
4.5 防止 CPA 污染措施60
4.6 CPA 策略运用展望60-62
第5章 结论62-63