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目录5-7
摘要7-8
1 文献综述8-21
1.1 非编码RNA 的分类和作用8-16
1.1.1 小于 50nt 的非编码 RNA8-10
1.1.1.1 microRNA8-9
1.1.1.2 siRNA9-10
1.1.1.3 piRNA10
1.1.2 50nt 到 500nt 大小的中等 ncRNA10-15
1.1.2.1 小分子核RNA（snRNA）10-11
1.1.2.2 小胞浆RNA（scRNA）11
1.1.2.3 核仁小分子RNA（snoRNA）11-15
1.1.3 大于 500nt 的长链非编码 RNA15-16
1.2 非编码RNA 研究技术16-18
1.2.1 生物信息学方法预测新ncRNA16
1.2.2 ncRNA 的测序鉴定16-17
1.2.2.1 测序16
1.2.2.2 cDNA 文库测序16-17
1.2.3 生物芯片分析17
1.2.4 基因组SELEX 技术17-18
1.2.5 功能性的RNA 组学方法18
1.3 昆虫非编码RNA 的研究进展18-19
1.4 家蚕丝腺研究进展19-21
1.4.1 家蚕丝腺结构和生理功能19-20
1.4.2 家蚕丝腺基因研究进展20-21
2 引言21-22
2.1 研究目的和21
2.2 研究内容21-22
3 和方法22-33
3.1 实验器材与试剂22-24
3.1.1 实验22
3.1.2 实验仪器22
3.1.3 实验试剂及溶液配制22-24
3.1.3.1 主要药品与试剂22-23
3.1.3.2 试剂配制23-24
3.2 主要实验方法24-33
3.2.1 引物设计24-25
3.2.2 家蚕组织中总RNA 的提取25
3.2.3 RNA 的纯化25-26
3.2.4 变性PAGE 电泳检测RNA26
3.2.5 探针的合成26-28
3.2.5.1 质粒的提取26-27
3.2.5.2 质粒载体线性化27
3.2.5.3 酶切产物纯化回收27-28
3.2.5.4 体外转录合成探针28
3.2.6 Northern 杂交28-29
3.2.6.1 RNA 样品的变性PAGE 电泳28
3.2.6.2 转膜28
3.2.6.3 RNA 的紫外交联28-29
3.2.6.4 预杂交29
3.2.6.5 杂交29
3.2.6.6 洗膜29
3.2.6.7 压片、29
3.2.7 宿主基因的RT-PCR29-30
3.2.7.1 cDNA 条链的合成29-30
3.2.7.2 PCR 反应30
3.2.8 非编码RNA 的RT-PCR30-32
3.2.8.1 RNA 去磷酸化30
3.2.8.2 去磷酸化产物的trizol 纯化30-31
3.2.8.3 RNA 的3’加接头的方法31
3.2.8.4 反转录和cDNA 合成31-32
3.2.9 DNA 琼脂糖胶电泳32
3.2.10 丝腺细胞核、质 RNA 的分离32-33
4 结果与分析33-42
4.1 Northern 分析ncRNA 在家蚕组织的差异33-35
4.1.1 家蚕不同组织部位总RNA 的提取及定量33
4.1.2 Northern 探针的制备及质量检测33-35
4.1.3 丝腺高丰度表达非编码RNA 的筛选35
4.2 丝腺高丰度表达的ncRNA 在前、中，后丝腺的分布情况35-38
4.3 丝腺高丰度表达的ncRNA 与宿主基因之间的关系38-39
4.4 丝腺高丰度表达的ncRNA 在丝腺细胞核、质的表达分析39-42
5 结果与讨论42-45
5.1 结果42
5.2 讨论42-45
5.2.1 丝腺高丰度表达ncRNA 的筛选43-44
5.2.2 丝腺高丰度表达ncRNA 在丝腺中的分布44-45